標準菌株驗證鑒定操作步驟實驗

發(fā)布時間：

2022-11-16

作者：

標準菌株驗證鑒定步驟

菌種活化:干粉標準菌株標準貯備菌株工作菌株;

金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌標準菌株:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板上,36±1培養(yǎng)18至24小時.并觀察菌落形態(tài).

金黃色葡萄球菌:菌落凸起,圓形,不透明;大腸埃希氏菌:菌落稍凸,圓形,濕潤,乳白色;銅綠假單胞菌:菌落扁平,圓形,邊緣不整齊,光滑濕潤,可產(chǎn)生藍綠或黃綠色素;枯草芽孢桿菌:表面粗糙不透明,鏡檢菌體有芽孢.

白色念珠菌:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種于改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基平板或PDA瓊脂平板上,30至35培養(yǎng)24至48小時.本菌細胞呈卵圓形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5至6倍,革蘭氏染色陽性,但著色不均勻.

黑曲霉:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種于改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上,23至28培養(yǎng)48至96小時.菌叢呈黑褐色,粗糙.

生孢梭菌:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,30至35培養(yǎng)18至24小時;或在厭氧條件下接種于哥倫比亞瓊脂上,30至35厭氧培養(yǎng)18至24小時.

菌種鑒定:

金黃色葡萄球菌:

革蘭氏染色試驗:革蘭氏陽性菌(紫色),葡萄狀排列,球菌.

兔血漿試驗:接種1個單菌落于1支兔血漿溶液中,30至35培養(yǎng)至6小時,每半小時觀察一次.凝固為陽性.金黃色葡萄球菌為陽性反應.

大腸埃希氏菌:

革蘭氏染色試驗:革蘭氏陰性桿菌,紅色.

IMVC生化試驗:

銅綠假單胞菌:

革蘭氏染色試驗:革蘭氏陰性桿菌,紅色.

氧化酶試驗:將氧化酶試紙用蒸餾水浸濕,用細玻璃棒或一次性接種針挑取單個菌落,涂在試紙上.在60s內(nèi)變?yōu)樗{色或藍紫色為陽性,不變色為陰性.

綠膿菌素試驗:取斜面培養(yǎng)物接種于PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面上,培養(yǎng)24小時,加三氯甲烷3至5ml至培養(yǎng)管中,攪碎培養(yǎng)基并充分振搖.靜置片刻,將三氯甲烷相移至另一試管中,加入1mol/L鹽酸試液約1ml,振搖后,靜置片刻,觀察.若鹽酸溶液呈粉紅色,為綠膿菌素試驗陽性,否則為陰性.本菌為綠膿菌素試驗陽性.

熒光試驗:接種于金氏B培養(yǎng)基(或假單胞菌產(chǎn)熒光色素培養(yǎng)基)上,36±1培養(yǎng)18至24小時,在366nm紫色燈下有藍綠色熒光.

枯草芽孢桿菌:

菌落形態(tài):表面粗糙不透明,有皺摺.

鏡檢:用芽孢染色液染色,菌體有芽孢.

白色念珠菌:

革蘭氏染色試驗:呈卵圓形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5至6倍,革蘭氏染色陽性,但著色不均勻.

念球菌顯色培養(yǎng)基:30至35培養(yǎng)24至48小時,呈綠色菌落.

產(chǎn)芽管試驗:挑取1%吐溫80至玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物,接種于加有一滴血清的載玻片上,蓋上蓋玻片,置濕潤的平皿內(nèi),置35至37、1至3小時,置顯微鏡下觀察,可見到由孢子長出短小芽管.

黑曲霉:23至28培養(yǎng)48至96小時.菌叢呈黑褐色,粗糙,有黑色孢子產(chǎn)生.

生孢梭菌:

革蘭氏染色試驗:革蘭陽性梭菌,有或無卵圓形或球形的芽孢.

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基試驗:接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上,置厭氧條件下培養(yǎng)48至72小時,應生長.