菌種常用保藏方法及優(yōu)缺點有哪些？
發(fā)布時間：
2022-12-24
作者：
接觸平皿廠家
菌種常用保藏方法及優(yōu)缺點
1.斜面低溫保藏法
將待保藏的菌種接種在合適的斜面培養(yǎng)基上,在相應(yīng)的條件下培養(yǎng)至得到充足的菌體或者孢子,隨后密封試管置于4攝氏度左右保存,具體保存溫度按照保存菌種設(shè)定.保藏時間依微生物的種類從1個月到4個月不等.
此法適用范圍廣(細菌、霉菌、放線菌、酵母均適用),操作簡便,成本低廉,復(fù)蘇方便,人員能隨時對微生物的狀態(tài)進行觀察.缺點是保藏時間較短,需要經(jīng)常傳代處理,因連續(xù)傳代而容易引入基因突變或者雜菌,培養(yǎng)基的理化性質(zhì)及微生物代謝產(chǎn)物等原因還會導(dǎo)致微生物性狀發(fā)生改變.
因此斜面低溫保藏法適于短期保存常用菌株,而且應(yīng)該與其他能夠長期保存菌株的方法相結(jié)合防止種系丟失.
2.液體石蠟保藏法
此法是斜面低溫保藏法的一種改進,只需將無菌干燥的液體石蠟注入上述培養(yǎng)好的斜面至高于斜面頂端1厘米處,再將試管密封,直立于4攝氏度左右冷藏保存,具體保存溫度隨菌種而變.注意要定期添加石蠟保證斜面處于液面以下.保藏時間至少可以達到1年(無芽孢細菌、酵母),甚至更長
液體石蠟保藏法基本上克服了斜面低溫保藏法保存時間短的缺點,然而液體石蠟保藏法由于要試管直立保存,因此比較耗費空間,不便于攜帶.
此法要注意以下兩點:①石蠟要保證無水,干熱160攝氏度,2h滅菌后的石蠟可直接使用,若是用高壓濕熱121攝氏度,20分鐘滅菌法滅菌,則要置于烘箱中至水分蒸發(fā),石蠟液體變澄清后再使用；②用接種環(huán)取種復(fù)蘇時,注意接種環(huán)要充分冷卻防止液體石蠟飛濺傷人.
3.半固體穿刺保藏法
配制半固體培養(yǎng)基,高壓濕熱滅菌后倒于無菌試管中至約1/3,待培養(yǎng)基凝固,用接種環(huán)從平面培養(yǎng)基上挑取單菌落,穿入培養(yǎng)基若干次.在合適的條件下進行培養(yǎng)至菌體旺盛生長,之后密封試管,根據(jù)菌種特點在4攝氏度左右或者涼爽干燥處保存.保存時間至少可以達到1年,對于有些菌種甚至能達到20年之久.
此方法主要適用于工程大腸桿菌等細菌,操作簡便,保存時間較長,適用于實驗室使用,保存時注意培養(yǎng)基的營養(yǎng)不宜過于豐富,以進一步降低細菌的代謝.此法也可以用石蠟對培養(yǎng)基進行液封從而延長保藏時間.
4.沙土管保藏法
這種方法適用于能產(chǎn)生孢子的微生物,如霉菌、放線菌,因此在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最廣.保藏效果亦較好,可以達到2年左右.但是此法對于營養(yǎng)細胞效果不好.操作的時候應(yīng)該注意抽干一步務(wù)必要快,盡量在12h內(nèi)完成,防止孢子萌發(fā),降低保藏效果.
5.加入保護劑凍存保藏法
體積分數(shù)10%~20%甘油是最常見的菌種凍存保護劑,將成熟期菌種培養(yǎng)物制成懸濁液于凍存管中,加入一定體積的無菌甘油,使甘油的最終體積分數(shù)為10%~20%,密封.可以根據(jù)實驗室的條件將菌種置于液氮,干冰,-80攝氏度冰箱,或者-20攝氏度冰箱中保存,溫度越低保存時間越長.脫脂牛奶也可以作為某些菌株的凍存保護劑,用經(jīng)過脫脂滅菌工序后的鮮牛奶洗去固體培養(yǎng)基上的菌苔,制成菌種懸濁液,于凍存管密封后冷凍保存.
加入保護劑凍存的方法操作比較麻煩,對設(shè)備要求相對較高,然而此法應(yīng)用范圍極廣,除適用于一般微生物菌種保藏外,還適用于一些難以保存的微生物,如支原體、衣原體、氫細菌、噬菌體以及難于形成孢子的霉菌.在低溫條件下微生物的代謝完全停滯,因此此法保存時間長,可以使微生物的遺傳物質(zhì)以及表觀性狀較為穩(wěn)定.應(yīng)用此法對微生物進行保藏的關(guān)鍵,一是選取最合適的保護劑；二是注意要“慢凍快化”:冷凍時降溫速率保持1攝氏度/分鐘,復(fù)蘇時用37攝氏度水浴,能保證菌種最大的成活率.
6.冷凍真空干燥保藏法
將處于成熟期的微生物培養(yǎng)物(若微生物可以產(chǎn)生孢子,則應(yīng)該盡量使微生物大量產(chǎn)生孢子)懸浮于無菌的血清、卵白、脫脂奶或者海藻糖等保護劑中制成濃菌液,分裝到無菌的安瓿瓶中,于低溫冰箱中冷凍,達到預(yù)定溫度后對濃菌液進行冷凍干燥處理,之后在真空狀態(tài)下融封安瓿瓶,于20攝氏度保藏.
冷凍真空干燥法雖然操作復(fù)雜,需要使用冷凍干燥以及抽真空的設(shè)備,然而一旦保存好,則可以最小程度地減少微生物的改變、死亡和泄露擴散,因此適用于大批量菌種的長期保存,特別是一些致病微生物的保存.該法是各種保存方法中最為有效的方法之一,對于大多數(shù)微生物都適用,包括一些難于保存的致病菌,如腦膜炎球菌和淋病球菌.