莢膜染色法實(shí)驗(yàn)是怎么做的？

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-24

作者：

莢膜染色法

一目的要求

學(xué)習(xí)并掌握莢膜染色的基本方法.

二基本原理

莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外面的一層粘液性物質(zhì),其主要成分是多糖類,不易被染色,故常用襯托染色法,即將菌體和背景著色,而把不著色且透明的莢膜襯托出來.莢膜很薄,易變形,因此,制片時(shí)一般不用熱固定.

三器材

圓褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）；

莢膜染色液,純甲醇等.

四操作步驟

方法一:

1 在載玻片一端滴一滴無(wú)菌水,取少許培養(yǎng)了72小時(shí)的圓褐固氮菌在水滴中制成懸液.取一滴新配好的黑色素溶液（也可用繪圖墨水）與菌懸液混合,另取一塊載玻片作為推片,將推片一端平整的邊緣與菌懸液以30度角接觸后,順勢(shì)將菌懸液推向前方,使其成勻薄的一層,風(fēng)干.

2 用純甲醇固定1分鐘.

3 加番紅液數(shù)滴于涂片上,沖去殘余甲醇,并染30秒鐘,以細(xì)水流適當(dāng)沖洗,吸干后油鏡檢查,背景黑色,莢膜無(wú)色,細(xì)胞紅色.

方法二:

① 將剛果紅水溶液和明膠水溶液各一滴滴于干凈載片上；用接種環(huán)蘸取細(xì)菌培養(yǎng)液或懸浮液在載片上于上述兩滴溶液混勻,自然干燥；滴加1%HCl沖洗,使涂片呈藍(lán)色；用蒸餾水漂洗,除去HCl；,用美藍(lán)復(fù)染1分鐘,水洗,自然干燥后鏡檢.

鏡檢:有莢膜的菌,菌體藍(lán)色,莢膜不著色,背景藍(lán)紫色；無(wú)莢膜的菌,菌體藍(lán)色,背景藍(lán)紫色.由于干燥菌體收縮,菌體四周也可能有一圈狹窄的不著色環(huán),但這不是莢膜.莢膜不著色的部分寬.

方法三:TyLer法

a 涂片:按常規(guī)法涂片,在空氣中自然干燥.

b 染色:用結(jié)晶紫冰醋酸染5-7分鐘.

c 用20%CuSO4水溶液洗,再用毛邊紙吸干.

d 鏡檢并觀察結(jié)果:莢膜藍(lán)紫色,細(xì)胞暗藍(lán)色.

方法四: 濕墨汁法

a 制菌液:加一滴墨汁于潔凈的波片上,并挑少量菌與其充分混合.