中國(guó)藥典微生物培養(yǎng)基技術(shù)問(wèn)答七
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-24
作者：
國(guó)產(chǎn)山東培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)
31 環(huán)境監(jiān)測(cè)用平皿預(yù)培養(yǎng)溫度和時(shí)間?
答：30-35攝氏度,時(shí)間不少于48h
32 靈敏度檢測(cè)如何確定接種菌數(shù)量?
答：菌液在接種至靈敏度檢測(cè)用培養(yǎng)基的同時(shí)用微生物限度檢查法的平皿法測(cè)定每1毫升菌液的cfu.
33 如何驗(yàn)證消毒劑消毒效果?
答：目前沒(méi)有統(tǒng)一的方法,自行設(shè)計(jì).
34 消毒劑消毒效果如何驗(yàn)證？如何設(shè)定SAL接受標(biāo)準(zhǔn)?
答：目前沒(méi)有統(tǒng)一的方法,自行設(shè)計(jì).
35 驗(yàn)證試驗(yàn)中,若供試品需加入β-內(nèi)酰胺酶,那么陽(yáng)性對(duì)照管是否應(yīng)該加入等量β-內(nèi)酰胺酶?
答：驗(yàn)證試驗(yàn)時(shí),不加,因?yàn)閷?duì)照管是用于比較試驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況的. 檢驗(yàn)時(shí)的陽(yáng)性對(duì)照則加.
36 全封閉式無(wú)菌驗(yàn)證中,用0.9%Nacl溶液溶解后,抽入集菌器中,樣品溶液是否要停留幾秒鐘？讓樣品與濾膜充分接觸或者停留后溶液造成抗生素殘角？如何停留幾秒鐘？應(yīng)在100毫升試停留還是50毫升時(shí)停留合適?
答：不應(yīng)停留,應(yīng)讓樣品盡快通過(guò),避免抑菌成分被吸附.薄膜過(guò)濾法的目的是僅讓微生物截留在濾膜上.
37 每張濾膜每次沖洗量一般100毫升,總沖洗量不得超過(guò)1000毫升,若供試品容量較大,總供試品樣品量按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定超過(guò)1000毫升,那這種情況應(yīng)如何看待呢?
答：中國(guó)藥典未規(guī)定供試品溶液的體積,設(shè)計(jì)檢驗(yàn)方法時(shí),兼顧供試品溶液的濃度和體積,盡量采用較小的體積.
38 裝消毒劑的容器是否要求滅菌？例如用可滅菌的不銹鋼材質(zhì),因?yàn)樗芰系娜萜鞑荒軠缇鷨?wèn)題.
答：應(yīng)該滅菌
39 配制用水最長(zhǎng)可以放置多久?
答：視放置條件,經(jīng)驗(yàn)證,自己設(shè)定.
40 對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證,多久進(jìn)行一次?
答：根據(jù)自己工作情況,自己制訂.
41 微生物限度檢查時(shí)所用吸管是否均需計(jì)量?
答：無(wú)規(guī)定.
42 無(wú)菌,微生物限度實(shí)驗(yàn),樣品與陽(yáng)性對(duì)照可以共用一個(gè)培養(yǎng)箱嗎？答：有2種意見(jiàn)：其一,條件許可,分開(kāi),以免污染；其二,共用一個(gè)培養(yǎng)箱,使其在相同條件下培養(yǎng). 我們：分開(kāi).
43 在無(wú)菌檢查項(xiàng)下,供試品檢驗(yàn)時(shí),陽(yáng)性對(duì)照是否必須每批都需做？是否供試品無(wú)菌試驗(yàn)跟陽(yáng)性對(duì)照必須同步操作？
答：ChP要,同步.
44 生產(chǎn)企業(yè)一次生產(chǎn)80mg/瓶的凍干粉36000瓶,企業(yè)取20瓶
做無(wú)菌檢驗(yàn),是否應(yīng)另增加10瓶做陽(yáng)性試驗(yàn)？（方法：薄膜過(guò)濾法,濾膜三分法,一份陽(yáng)性,另兩份置兩種不同培養(yǎng)基中.
答：是,總共需30瓶.
45 培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)所用的菌種有6種,為什么沒(méi)有大腸？
答：有專家解釋：因銅綠與大腸均為革蘭氏陰性桿菌,而銅綠在醫(yī)院及自然界中更廣泛存在,致病性更強(qiáng).
46 如果產(chǎn)品經(jīng)無(wú)菌驗(yàn)證后,是以大腸為對(duì)照菌時(shí),可行嗎？
答：如果驗(yàn)證6種菌均可行,建議按藥典陽(yáng)性對(duì)照章節(jié)的要求,設(shè)定陽(yáng)性對(duì)照菌.如果驗(yàn)證結(jié)果樣品是抗革蘭陰性菌的,則陽(yáng)性菌應(yīng)用大腸埃希菌.
47 靈敏度試驗(yàn)可要加入大腸?
答：否.
48 薄膜過(guò)濾法中,菌懸液的加入,在最后一次的沖洗液中加入小
于100cfu的試驗(yàn)菌,過(guò)濾,這個(gè)說(shuō)法用封閉式過(guò)濾器（）要如何做？如果做法是加入培養(yǎng)基后,再?gòu)墓茏永锛?毫升的100cfu的菌,可行嗎?
答：在最后一次沖洗液中,經(jīng)封閉式過(guò)濾器頂部的透氣孔加入1毫升的少于100cfu的菌液,抽干,再加培養(yǎng)基.
48 "全封閉式無(wú)菌檢驗(yàn)中,每張濾膜每次沖洗量一般為100毫升,我們驗(yàn)證的是50毫升*3+100毫升*3,總沖洗量不超1000毫升,可行嗎？"
答：可行.
49 《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證中“菌種加在最后一次沖洗液中,過(guò)濾”,如果某供試品無(wú)菌檢查方法無(wú)需進(jìn)行沖洗,那么菌懸液應(yīng)該加在哪合適?
答：藥典無(wú)規(guī)定,可在過(guò)濾完樣品后直接加菌液,然后加入培養(yǎng)基.
50 "無(wú)菌驗(yàn)證后,試驗(yàn)菌數(shù)經(jīng)測(cè)定,若加入菌數(shù)大于100cfu,該情況如何處理？是否需要判斷其試驗(yàn)無(wú)效,重新驗(yàn)證"
答：重新驗(yàn)證.
51 南方天氣濕度大,易發(fā)霉,毛巾或者衣服上可能有黑色的霉點(diǎn)洗不干凈,請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有好的方法去除霉點(diǎn)?
答：漂白 消毒.
52 粉針注射劑,同一個(gè)品種有不同規(guī)格的產(chǎn)品,在建立方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)是否每個(gè)規(guī)格都需要進(jìn)行驗(yàn)證?
答：理論上,以最大規(guī)格建立的方法應(yīng)適用于其他較小規(guī)格. 但這樣做可能會(huì)提高成本,因小規(guī)格的沖洗量 滅活劑等用量可能可以更少,難以一概而論.
53 無(wú)菌檢查方法中陰性對(duì)照,每瓶溶劑,稀釋液,沖洗液都需要收集,是不是每做一批試驗(yàn),都需同時(shí)操作兩臺(tái)集菌儀？陰性對(duì)照能否每一批溶劑,稀釋液,沖洗液抽一 兩瓶做陰性對(duì)照?
答：不一定每做一批試驗(yàn),都需同時(shí)操作兩臺(tái)集菌儀. 陰性對(duì)照不應(yīng)該僅僅每一批溶劑,稀釋液,沖洗液抽一 兩瓶做陰性對(duì)照,應(yīng)盡可能將所用到的每瓶都留少量做陰性.
54 "每一張膜總沖洗量不得超過(guò)1000毫升,這個(gè)總沖洗量包括樣品溶液?jiǎn)幔?quot;
答：不包括.
55 無(wú)菌性檢查,培養(yǎng)基是直接拿去培養(yǎng),還是按照說(shuō)明書滅菌處理后再拿去培養(yǎng)?
答：成品培養(yǎng)基直接培養(yǎng)；脫水培養(yǎng)基或自己配制的培養(yǎng)基滅菌后拿去培養(yǎng).
56 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（中檢所）極易被氧化,藥檢所做實(shí)驗(yàn)時(shí)是將管裝量定在多高？
答：我們所用的是全封閉一次性濾筒,裝量100毫升,高度約6.5cm.57 如果培養(yǎng)過(guò)程氧化層高度已超過(guò)藥典中要求的1/2高度,并發(fā)現(xiàn)其中長(zhǎng)菌,結(jié)果如何判定？若未長(zhǎng)菌,結(jié)果判定認(rèn)為無(wú)菌是否成立？此類問(wèn)題應(yīng)該如何衡量?
答：如果培養(yǎng)過(guò)程氧化層高度已超過(guò)藥典中要求的1/2高度,并發(fā)現(xiàn)其中長(zhǎng)菌,可判斷為不合格； 若未長(zhǎng)菌,按藥典,結(jié)果判定認(rèn)為無(wú)菌應(yīng)不成立； 此類問(wèn)題應(yīng)該照藥典執(zhí)行,培養(yǎng)后不超過(guò)1/2高度.
58 “無(wú)菌性檢查中每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶）”,這句話中的“5支（瓶）”是5支或5瓶,還是5支和5瓶？”
答：或
59 潔凈區(qū)與陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)如何分別設(shè)置？送風(fēng)分離,回風(fēng)分離,或兩者均分離？即2套空調(diào)系統(tǒng)？
答：2套系統(tǒng)互不相干.
60 十四烷酸異丙酯若經(jīng)驗(yàn)證后,不影響陽(yáng)性菌生長(zhǎng),可否濕熱滅菌？答：濕熱滅菌的水蒸氣可能會(huì)影響十四烷酸異丙酯的性能,建議按藥典.
61 沖洗液的濾清,加入不渾濁,是否可不用過(guò)濾?
答：可
62 無(wú)菌檢查時(shí),陽(yáng)性對(duì)照的接種與培養(yǎng)是否也必須和供試品培養(yǎng)同一天進(jìn)行?
答：應(yīng)同步操作.
63 使用的消毒劑應(yīng)無(wú)菌,比如購(gòu)買的新潔而滅要用無(wú)菌的4.5微米濾膜過(guò)濾再用嗎?
答：如用在關(guān)鍵地方,建議過(guò)濾.
64 產(chǎn)品穩(wěn)定性考察,有無(wú)菌檢查項(xiàng)目,請(qǐng)問(wèn)留樣產(chǎn)品的無(wú)菌檢查的數(shù)量和常規(guī)檢查的數(shù)量要一樣嗎？如果是,留樣量就會(huì)相當(dāng)大,有的藥品比較貴重,這樣會(huì)造成企業(yè)較大的損失.
答：無(wú)菌檢查的數(shù)量和常規(guī)檢查的數(shù)量應(yīng)一樣. 按藥典穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則附表,該做就應(yīng)做,但若情況特殊,或許可減低檢驗(yàn)頻次,但如此一來(lái),可能一些藥品注冊(cè)審評(píng)專家或GMP檢查員會(huì)有不同意見(jiàn).穩(wěn)定性試驗(yàn)的無(wú)菌檢查很大程度是在考察包裝.
65 做培養(yǎng)基適用性與方法驗(yàn)證時(shí),若加菌量為100~120cfu＞100cfu,是否需要重新做驗(yàn)證?
答：要.
qdrishui青島日水培養(yǎng)基