細(xì)菌的保藏方法有哪些?
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-24
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細(xì)菌的保藏方法有哪些
細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物中:一般細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物可以維持兩年.具體方法:用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落,針緩慢穿過瓊脂到達(dá)瓶底,連續(xù)幾次,蓋上瓶蓋擰緊,做好標(biāo)記.室溫下存放于暗處.(最好一點(diǎn)可以將瓶蓋放松,在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)過夜,再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜,室溫或最好在4度避光保存).
細(xì)菌保存于含有甘油的培養(yǎng)物中:
在液體培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌培養(yǎng)物:取0.85毫升細(xì)菌培養(yǎng)物,加入0.15毫升高壓滅菌甘油,振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻,然后轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的保存管內(nèi),密封,在乙醇-干冰或液氮中凍結(jié)后再轉(zhuǎn)至-70度長期保存.在復(fù)蘇時(shí),用滅菌接種針刮取凍結(jié)的培養(yǎng)物表面,然后立即把黏附于接種針上的細(xì)菌劃于含適當(dāng)抗生素的LB瓊脂平板表面,于37度過夜.
在瓊脂平板上生長的細(xì)菌培養(yǎng)物:從瓊脂平板表面刮下細(xì)菌放入裝有2毫升LB的無菌試管內(nèi),再加入等量的含有30％滅菌甘油的LB培養(yǎng)基,振蕩使甘油完全分布均勻后,分裝于無菌保存管內(nèi),密封,再按前述方法冰凍保存.這一方法的優(yōu)點(diǎn)在于可用于保存在質(zhì)粒載體上建立的cDNA文庫.
如果甘油與培養(yǎng)基混合后凍存在一般冰箱的冰凍室里,不能反復(fù)復(fù)蘇使用,而且如果甘油含量太低,凍結(jié)成冰塊,復(fù)蘇效果不佳.一般都使用甘油終濃度為30%.
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