控制菌檢查法:沙門菌的檢查
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
2015版藥典中非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查:
控制菌檢查法——沙門菌的檢查
沙門菌屬是腸桿菌科的重要致病菌屬,該檢查項(xiàng)要求微生物鑒別到“屬”水平。沙門菌,耐膽鹽革蘭氏陰性菌和大腸埃希氏菌這三個(gè)檢查項(xiàng)目主要針對口服制劑包括化學(xué)藥品,中藥或相關(guān)的原輔料。沙門菌屬具有較強(qiáng)的致病性,在食品微生物污染的溯源分析中對沙門氏菌的菌株分型已有廣泛的研究。
2015年版藥典和前幾版藥典對沙門菌的檢測程序基本一致,均包括增菌,選擇性增菌和分離培養(yǎng)三個(gè)步驟,但采用的培養(yǎng)基不同。TSB替代了營養(yǎng)肉湯用于增菌培養(yǎng),RV沙門菌增菌液體替代了TTB用于選擇性增菌,木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂（X升D）替代了DH升或SS瓊脂用于沙門菌的分離確認(rèn),其基本流程見下圖
RV和X升D不能耐受高溫,因此配制滅菌時(shí)應(yīng)嚴(yán)控配制條件。RV培養(yǎng)基通過氯化鎂和孔雀綠的共同作用,可一定程度上抑制革蘭氏陽性菌,大腸桿菌,痢疾桿菌和傷寒桿菌的生長。與麥康凱液體的抑制抑菌能力要求相似,在測試RV培養(yǎng)基的抑制能力時(shí),實(shí)驗(yàn)室可通過細(xì)化金黃色葡萄球菌的接種上限,保證實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化操作水平。此外,各國藥典收載的RV配方中均含有六水合氯化鎂（毫克C升2·6H2O,分子量:203.3）,而常見市售的RV配方中常用氯化鎂（毫克C升2,分子量95.2）,相同當(dāng)量的兩種物質(zhì)的質(zhì)量相差近一倍。因此在選擇培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)結(jié)合藥典培養(yǎng)基處方對商品培養(yǎng)基的處方進(jìn)行確認(rèn)。干粉培養(yǎng)基的生產(chǎn)過程中,六水合氯化鎂不易與其他成分混合均勻,因此大多培養(yǎng)基處方中選用無水氯化鎂,但無水氯化鎂極具引濕性,因此生產(chǎn),貯存,包裝都應(yīng)保證培養(yǎng)基粉末處于較低的濕度環(huán)境。
RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基（10371-1）
一,配方: 克/升
大豆胨 4.5克,氯化鈉 8.0克,磷酸氫二鉀 0.4克,磷酸二氫鉀 0.6克,無水氯化鎂 13.58克,孔雀綠 36毫克,pH5.2±0.2（25攝氏度）
二,配制方法:
稱取本品27.2克于1升蒸餾水或去離子水中（可按比例增加或減少配制量）,加熱攪拌煮沸至完全溶解,分裝,115攝氏度高壓滅菌20分鐘,備用。
三,作用:用于沙門菌的選擇性增菌
四,原理:
大豆胨提供碳源和氮源滿足細(xì)菌生長的需求;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;磷酸鹽是緩沖劑;氯化鎂增加培養(yǎng)基的滲透壓;孔雀綠抑制非沙門氏菌的細(xì)菌生長;較低的pH結(jié)合氯化鎂和孔雀綠使培養(yǎng)基具有較高的選擇性。
五,產(chǎn)品外觀:
脫水干粉培養(yǎng)基:淡青色粉末,均勻,無雜質(zhì)
培養(yǎng)基溶解后:藏藍(lán)色溶液,澄清透明底部有少量白色不溶物
六,生長檢測:
質(zhì)控菌株及編號:乙型副傷寒沙門氏菌 CMCC(B)50094 指標(biāo):促生長能力 培養(yǎng)溫度:42-44攝氏度 培養(yǎng)時(shí)間:18～24h 質(zhì)控評判標(biāo)準(zhǔn):肉湯渾濁
質(zhì)控菌株及編號:金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26003 指標(biāo)抑制能力 培養(yǎng)溫度:42-44攝氏度 培養(yǎng)時(shí)間:18～24h 24h 質(zhì)控評判標(biāo)準(zhǔn):肉湯澄清
木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基（10372-1）
一,配方: 克/升
酵母浸出粉 3.0克,升-賴氨酸 5.0克,木糖 3.5克,乳糖 7.5克,蔗糖 7.5克,脫氧膽酸鈉 2.5克,枸櫞酸鐵銨 0.8克,硫代硫酸鈉 6.8克,氯化鈉 5.0克,酚紅 0.08克,瓊脂 13.5克,pH7.4±0.2(25攝氏度)
二,配制方法:
稱取本品55.2克于1升蒸餾水或去離子水中,攪拌煮沸溶解1分鐘,冷卻至50—55攝氏度,傾注平皿。
三,作用:用于沙門菌的選擇性分離
四,原理:
酵母浸出粉提供氮源,維生素,生長因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;木塘,乳糖,蔗糖為可發(fā)酵糖類,發(fā)酵糖產(chǎn)酸的菌落呈黃色;脫氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌,但不影響沙門氏菌的生長;硫代硫酸鈉可以被某些細(xì)菌還原硫化氫,與枸櫞酸鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;酚紅為pH指示劑。
五,產(chǎn)品外觀:
脫水干粉培養(yǎng)基:淡黃色粉末,均勻,無雜質(zhì)
滅菌后融化狀態(tài)培養(yǎng)基:深紅色液體,無沉淀或絮狀物
平板凝膠培養(yǎng)基:紅色,無不溶物
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI) 10310
一,配方:克/升
胨 20.0克,牛肉浸出粉 5.0克,氯化鈉 5.0克,乳糖 10.0克,蔗糖 10.0克,葡萄糖 1.0克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.2克,酚磺酞 0.025克,瓊脂 12.0克,pH7.3±0.1（25攝氏度）
二,配制方法:
稱取本品63.4克于1升蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸至完全溶解,分裝試管,121攝氏度高壓滅菌15分鐘,滅菌結(jié)束后制成高層斜面,備用。
三,作用:用于腸桿菌科細(xì)菌生化試驗(yàn)
四,原理:
蛋白胨,牛肉浸粉提供氮源,維生素,礦物質(zhì)；乳糖,葡萄糖,蔗糖為可發(fā)酵糖類,其產(chǎn)酸時(shí)通過酚紅指示劑測出,酸性呈黃色,堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫,與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
五,產(chǎn)品外觀:
脫水干粉培養(yǎng)基:淡黃色粉末,均勻,無雜質(zhì)
平板凝膠培養(yǎng)基:紅色,無不溶物六,生長圖片