甘油冷凍保藏菌種的原理及注意事項
發(fā)布時間：
2022-12-27
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甘油冷凍保藏菌種的原理及注意事項
菌種保藏是將微生物菌種采用適宜的方法妥善保藏,避免其死亡、污染,并保持其原有性狀基本穩(wěn)定的一種實驗方法,也是微生物實驗室極為重要的一項基礎(chǔ)性工作.
甘油冷凍保藏菌種是目前實驗室應(yīng)用最為廣泛的一種的菌種保藏方法,原理是以甘油為保護(hù)劑,低溫冷凍條件下,使微生物的新陳代謝趨于停止,從而達(dá)到長期有效的保藏.一般來說,保藏溫度越低,保藏效果越好,目前實驗室大都采用-80攝氏度(-70攝氏度)冰箱保藏.主要有以下注意事項：
1.選擇合適的培養(yǎng)基
勿使用選擇性培養(yǎng)基.一般使用非選擇性的增菌培養(yǎng)基,因為微生物在選擇性培養(yǎng)基中生長某些生物特性可能丟失,保藏的菌種的生物特性可能與標(biāo)準(zhǔn)菌株特性不同.
2.菌液的濃度
菌液的濃度一般越大,菌種保存時間越長.保藏時細(xì)菌常使用菌液,霉菌常用無菌水或生理鹽水制備成的孢子懸液.
3.甘油濃度
甘油終濃度一般為10%~20%.由于甘油原液太粘稠,需要配制合適的甘油-水溶液,將菌懸液與甘油以1:1的體積比充分混勻后,分裝至提前滅菌好的保藏管中,-80攝氏度(-70攝氏度)冰箱保存.
4.反復(fù)使用
對菌種進(jìn)行保藏時注意“慢凍快化”,冷凍時降溫速率保持1攝氏度/min,復(fù)蘇時用37攝氏度水浴融化,能夠保證菌種最大的成活率.當(dāng)冷凍菌種融化后,應(yīng)避免再次冷凍,否則菌體的生存率會大幅度降低.
5.保存時間該方法適合中長期菌種保藏,保藏時間一般為2-4年左右.