培養(yǎng)基的滅菌方法有哪些？
發(fā)布時間：
2022-12-27
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微生物培養(yǎng)基的滅菌方法
滅菌的方法,通?？梢苑譃榧訜釡缇?包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒)、過濾去菌、射線滅菌和消毒、化學(xué)藥劑滅菌和消毒四大類.下面具體講解微生物培養(yǎng)基的滅菌方法.
干熱滅菌法(即熱空氣滅菌法):干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器.前面所包裝好的玻璃器皿,如帶棉塞的三角瓶,試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等,放入電熱烘箱中.
打開烘箱頂部的通氣孔,接上電源加熱,使箱內(nèi)空氣的溫度達(dá)到160~170,關(guān)閉通氣孔使箱內(nèi)的溫度保持在160左右并維持1.5-2h.時間一到,切斷電源.待溫度下降60~70以下,方可打開箱門取滅菌物品,否則驟冷后易使箱內(nèi)玻璃儀器破損.
加壓蒸氣滅菌法:利用高壓滅菌器,使水的沸點(diǎn)在密閉的滅菌器內(nèi)隨壓力升高而增高,來提高蒸汽的溫度和滅菌的效率.
在同一溫度下濕熱的殺菌效率比干熱大,因?yàn)槲⑸锛?xì)胞蛋白質(zhì)在濕熱情況下,易干凝固.同時濕熱的穿透力強(qiáng),當(dāng)水蒸汽與被滅菌的物品相接觸后,便放出汽化潛熱,逐步提高被滅菌物品的溫度,直至與水蒸汽的溫度相等,達(dá)到平衡為止,從而提高滅菌效率.
手提式高壓滅菌鍋滅菌的操作步驟如下：
在滅菌器內(nèi)加入一定量的水(有的滅菌器內(nèi)加水至止水線).將用防水紙包扎好的滅菌物品如培養(yǎng)基、無菌水等,放進(jìn)滅菌器內(nèi).
接通電源,進(jìn)行加熱.
當(dāng)壓力到達(dá)5bl/in2時,打開放氣閥,使鍋內(nèi)的空氣和水蒸汽一同排出,直至壓力表的壓力恢復(fù)到零,然后關(guān)閉排氣閥,繼續(xù)加熱.
當(dāng)壓力表＊的壓力到達(dá)15bl/in2(即1.05kg/cm2)時,此時滅菌器內(nèi)的溫度達(dá)到121,維持30分鐘不變.對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基滅菌時,應(yīng)適當(dāng)降低壓力,延長時間.
滅菌時間一到,切斷電源,待壓力下降至零時,才能打開排氣孔,然后打開滅菌器蓋,取出物品.如果滅菌后的固體培養(yǎng)基要做成斜面,需趁熱放置.還需檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底.
間歇滅菌法:常采用阿諾(Arnold)氏滅菌器和柯赫(Koch)氏滅菌器或蒸籠滅菌,常壓條件下蒸汽溫度不超過100.在沒有高壓滅菌器設(shè)備的情況下或不宜加壓滅菌的物品,可采用此法滅菌.
方法是：待滅菌物品放在滅菌器或蒸籠里,每d蒸煮1次,每次煮沸l(wèi)h,連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行.在每兩次蒸煮之間,將物品(指培養(yǎng)基)放在37C恒溫條件下培養(yǎng),這樣可以使每次蒸煮后未殺死的殘留芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體,以便下1次蒸煮時殺滅.
過濾除菌法:一些不能加熱滅菌的液體物質(zhì)(如維生素、血清),可以用過濾除菌法,一般用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌.
細(xì)菌過濾器中的過濾板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成,過濾板孔眼很小,細(xì)菌不能通過.因此,過濾后的液體就除去了細(xì)菌.在進(jìn)行過濾除菌前,整個細(xì)菌過濾器和接受液體的器皿,必須要包裝妥當(dāng)并進(jìn)行加壓蒸汽滅菌后方可使用.
下面介紹石棉板濾器的構(gòu)造及其操作方法.石棉板濾器又稱蔡氏(Scitz)濾器,它是由石棉制成的圓形濾板和一個特制漏斗組成.此漏斗分上下兩節(jié).上節(jié)為圓形金屬筒,下節(jié)為金屬漏斗.兩節(jié)由三個活動螺旋固定,便于裝卸.使用時拆開兩節(jié),將濾板放在漏斗上的金屬篩板,再加上上節(jié),然后將螺旋扭緊,將欲濾溶液置于濾器中抽濾.每次過濾必須用一張無菌的新濾板.石棉板濾器因容積大小不同而有各種型號,石棉板也有不同規(guī)格型號使用時必須根據(jù)需要搭配妥當(dāng).
紫外線滅菌:波長260~280nm之間的紫外線有很強(qiáng)的殺菌能力,一般紫外燈管能產(chǎn)生253.7nm的紫外光,殺死力強(qiáng)而穩(wěn)定,但穿透力弱一般只適宜物體表面、空氣滅菌.例如接種室、培養(yǎng)室、手術(shù)室、藥廠包裝室等空氣滅菌.一般30w燈管、9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h,就使室內(nèi)空氣滅菌.若照射紫外線時,先噴灑石碳酸等化學(xué)消毒劑,可增強(qiáng)滅菌效果.
在進(jìn)行微生物接種和分離等操作時,常須用紫外線來殺滅接種室(箱)空氣、臺面等處的微生物.
紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力,但穿透力較弱,即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用于空氣及表面殺菌.
紫外線對眼粘膜及視神經(jīng)有強(qiáng)烈的損傷作用,對皮膚有刺激作用,所以不能直接在紫外線燈開啟下工作和用眼睛直視開啟的紫外燈.
化學(xué)藥劑消毒滅菌:微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、新潔爾滅、煤酚皂溶液,它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑,以上就是微生物培養(yǎng)基的滅菌方法說明,如果你的培養(yǎng)基中所有的成分都可以耐高溫,那就用壓力蒸汽高溫滅菌的方式.如果你的培養(yǎng)基中有些成分不耐高溫,就可以用除菌過濾的方式除菌：用除菌濾器過濾培養(yǎng)基至已滅菌的培養(yǎng)器中.如何要求不高,部分試驗(yàn)用培養(yǎng)基,可以用煮沸的方式滅菌.