單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
GB 4789.30—2016 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)
李斯特菌（學(xué)名：Listeriamonocytogenes），又名單核球增多性李斯特菌、李氏菌，是一種兼性厭氧細(xì)菌，為李斯特菌癥的病原體。它主要以食物為傳染媒介，是最致命的食源性病原體之一，造成二至三成的感染者死亡。
目前國際上公認(rèn)的李斯特菌共有七個(gè)菌株：
1、單核細(xì)胞增生李斯特菌 2、綿羊李斯特菌 3、英諾克李斯特菌 4、威爾斯李斯特菌 5、西爾李斯特菌 6、格氏李斯特菌 7、默氏李斯特菌
其中單增李斯特菌是唯一能引起人類疾病的。單核增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一種常見的土壤細(xì)菌，在土壤中它是一種腐生菌，以死亡的和正在腐爛的有機(jī)物為食。它也是某些食物（主要是鮮奶產(chǎn)品）中的一種污染物，能引起嚴(yán)重食物中毒。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎和單核細(xì)胞增多。它廣泛存在于自然界中，食品中存在的單增李氏菌對人類的安全具有危險(xiǎn)，該菌在4℃的環(huán)境中仍可生長繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一。
第一條 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌定性檢驗(yàn)
鑒定：
1、染色鏡檢：李斯特氏菌為革蘭氏陽性短桿菌, 大小為( 0. 4 μ m~0. 5 μ m ) × ( 0. 5 μ m~2. 0 μ m ) ; 用生理鹽水制成菌懸液, 在油鏡或相差顯微鏡下觀察, 該菌出現(xiàn)輕微旋轉(zhuǎn)或翻滾樣的運(yùn)動。
2、 動力試驗(yàn): 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落穿刺半固體或 SIM動力培養(yǎng)基, 于25℃~30℃培養(yǎng)48h ,李斯特氏菌有動力, 在半固體或 SIM 培養(yǎng)基上方呈傘狀生長, 如傘狀生長不明顯, 可繼續(xù)培養(yǎng)5d ,再觀察結(jié)果
3、 生化鑒定: 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落, 進(jìn)行過氧化氫酶試驗(yàn), 過氧化氫酶陽性反應(yīng)的菌落繼續(xù)進(jìn)行糖發(fā)酵試驗(yàn)和 MR - V P 試驗(yàn)
4、溶血試驗(yàn): 將新鮮的羊血瓊脂平板底面劃分為2 0個(gè)~2 5個(gè)小格, 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落刺種到血平板上, 每格刺種一個(gè)菌落, 并刺種陽性對照菌( 單增李斯特氏菌、 伊氏李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌) 和陰性對照菌( 英諾克李斯特氏菌) , 穿刺時(shí)盡量接近底部, 但不要觸到底面, 同時(shí)避免瓊脂破裂,3 6℃±1℃ 培養(yǎng) 2 4h~4 8h , 于明亮處觀察, 單增李斯特氏菌呈現(xiàn)狹窄、 清晰、 明亮的溶血圈, 斯氏李斯特氏菌在刺種點(diǎn)周圍產(chǎn)生弱的透明溶血圈, 英諾克李斯特氏菌無溶血圈, 伊氏李斯特氏菌產(chǎn)生寬的、輪廓清晰的β- 溶血區(qū)域, 若結(jié)果不明顯, 可置 4℃ 冰箱 2 4h~4 8h 再觀察。
11403 李氏增菌肉湯（LB1，LB2）基礎(chǔ)用于李斯特氏菌增菌
31410李氏增菌肉湯LB1用于李斯特氏菌增菌
31411李氏增菌肉湯LB2用于李斯特氏菌增菌
10404PALCAM瓊脂基礎(chǔ)用于李斯特氏菌分離
21403PALCAM選擇性添加劑每支用于 100ml11404 中
31401PALCAM瓊脂用于李斯特氏菌分離
11409 李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基用于李斯特氏菌快速檢測， 48h 內(nèi)出結(jié)果，李斯特氏菌顯藍(lán)色有不透明暈環(huán)
11405血瓊脂基礎(chǔ)用于細(xì)菌溶血反應(yīng)
50701無菌脫纖維綿羊血
21406SIM動力試驗(yàn)管用于細(xì)菌動力試驗(yàn)
21411單核細(xì)胞增生李斯特氏菌套裝生化鑒定管 10種（GB 4789）包含尿素酶、半固體瓊脂、鳥氨酸、MR、VP、氨基酸對照、甘露醇、棉子糖、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、石蠟
21412單核細(xì)胞增生李斯特氏菌套裝生化鑒定管 12種（SN0184）包含尿素酶、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸、鳥氨酸、氨基酸對照、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、阿拉伯糖、液體石蠟