副溶血性弧菌的定性與定量檢測(cè)
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
副溶血性弧菌的定性與定量檢測(cè)
定性檢測(cè)
將5.1.3制備的1:10樣品勻液于36±1培養(yǎng)8小時(shí)~18小時(shí)
定量檢測(cè)
用無(wú)菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi),振搖試管混勻,制備1:100的樣品勻液.
另取1mL無(wú)菌吸管,按5.2.2.1操作程序,依次制備10倍系列稀釋樣品勻液,每遞增稀釋一次,換用一支1mL無(wú)菌吸管.
根據(jù)對(duì)檢樣污染情況的估計(jì),選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種3支含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管,每管接種1mL置36±1恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)8小時(shí)?18小時(shí)
分離
對(duì)所有顯示生長(zhǎng)的增菌液,用接種環(huán)在距離液面以下1cm內(nèi)沾取一環(huán)增菌液,于TCBS平板或弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離.一支試管劃線一塊平板.于36±1培養(yǎng)18小時(shí)-24小時(shí)
典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形,半透明,表面光滑的綠色菌落,用接種環(huán)輕觸,有類(lèi)似口香糖的質(zhì)感,直徑2mm-3mm.從培養(yǎng)箱取出TCBS平板后,應(yīng)盡快(不超過(guò)1小時(shí))挑取菌落或標(biāo)記要挑取的菌落.典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養(yǎng)基上的特征按照產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行判定.
純培養(yǎng)
挑取3個(gè)或以上可疑菌落,劃線接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板,36±1培養(yǎng)18小時(shí)?24小時(shí)
氧化酶試驗(yàn)：挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),副溶血性弧菌為氧化酶陽(yáng)性.
涂片鏡檢：將可疑菌落涂片,進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢觀察形態(tài).副溶血性弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀,弧狀,卵圓狀等多形態(tài),無(wú)芽胞,有鞭毛.
挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落,轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36±1培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果.副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑,無(wú)氣泡,斜面顏色不變或紅色加深,有動(dòng)力.
嗜鹽性試驗(yàn)
挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落,分別接種0%,6%,8%和10%不同氯化鈉濃度的胰胨水,36±1培養(yǎng)24小時(shí),觀察液體混濁情況.副溶血性弧菌在無(wú)氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng),在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛.
確定鑒定
取純培養(yǎng)物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基,賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基,MR-VP培養(yǎng)基,36±1培養(yǎng)24小時(shí)~48小時(shí)后觀察結(jié)果3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行ONPG試驗(yàn)可選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng).