蘇云金桿菌的部分生化試驗(yàn)鑒定
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
蘇云金桿菌的部分生化試驗(yàn)鑒定
目的要求:
應(yīng)用生物化學(xué)技術(shù)對(duì)昆蟲(chóng)病原細(xì)菌進(jìn)行鑒定,乃是一種十分簡(jiǎn)便快速的方法,鑒定蘇云金桿菌的生化指標(biāo)是:V,P反應(yīng),卵磷脂酶,蛋白水解,吐溫酶,水楊素,七葉靈,蔗糖,甘露糖,表膜,酶,淀粉,幾丁質(zhì)酶,精氨酸脫羥酶等.本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)簡(jiǎn)單的生化測(cè)定來(lái)了解蘇云金桿菌的生化鑒定技術(shù).
實(shí)驗(yàn)材料:
天平,電爐,藥勺,量筒,燒杯,pH試紙7,高壓鍋(手提式),接種環(huán)
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:
各種糖利用:
蛋白胨1%,瓊脂2%,蔗糖(甘露糖)1%,水楊素0.5%,1%酸性復(fù)紅水溶液0.5%.
蛋白胨加熱溶于水中,加入酸性復(fù)紅水溶液.分別加入一種糖加熱溶解,以不加糖的蛋白胨作對(duì)照.分裝試管,調(diào)pH至7.58,滅菌30分鐘.接種后于30恒溫培養(yǎng)檢查產(chǎn)酸情況,若培養(yǎng)基變紅者為正反應(yīng).
七葉靈利用:
牛肉膏1%,七葉靈0.5%,瓊脂2%,另配5%三氯化鐵水溶液?jiǎn)为?dú)滅菌.
培養(yǎng)基溶后,先將三氯化鐵每皿滴入2滴,后倒平板混勻.凝固后電接菌種,30培養(yǎng)3-5天.菌苔周圍出現(xiàn)深褐色區(qū)為陽(yáng)性反應(yīng).
淀粉水解試驗(yàn):
牛肉膏5克,NaCl5克,可熔性淀粉5克,瓊脂10克,蒸餾水1000毫升.
將試驗(yàn)菌點(diǎn)種于平板上,徒長(zhǎng)出菌落后,收Lugoc氏碘液傾注于平板表面,菌落四周有透明圈者為陽(yáng)性放應(yīng).
V,P反應(yīng):
蛋白胨5克,葡萄糖5克,NaCl5克,蒸餾水1000毫升；分裝試管30分鐘滅菌.
接菌后于37培養(yǎng)24小時(shí),每管加入4%KOH溶液10-20滴,再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后,用力振蕩.然后置37下保溫0.5小時(shí).培養(yǎng)物出現(xiàn)紅色即為V,P正反應(yīng),并設(shè)未接種的試管為對(duì)照.
卵磷脂酶試驗(yàn):
蛋白胨1%,酵母膏0.3%,NaCl0.5%,瓊脂2%,卵黃2-3%,pH7-7.2.
用75%酒精將新鮮雞蛋進(jìn)行表面消毒,并用經(jīng)火焰滅菌的鑷子將蛋兩端各打一個(gè)孔,傾去蛋清,然后用無(wú)菌5毫升吸管取出卵黃,加至觸化后冷卻至50攝氏度左右的培養(yǎng)基中,使卵黃含量為培養(yǎng)基總體積的2~3%.混勻后倒平板,點(diǎn)接菌種24小時(shí)后觀察,菌液邊緣出現(xiàn)混濁圈者表示卵鱗酯酶為陽(yáng)性.
菌膜形成試驗(yàn):
肉湯試管接種,30靜止培養(yǎng)24小時(shí)后觀察菌膜形成情況及搖動(dòng)后膜破粹情況.