GB5009.154-2016食品中維生素B6的測(cè)定
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
培養(yǎng)基用哪個(gè)廠家好
GB5009/5413系列相關(guān)培養(yǎng)基的用途及特點(diǎn)
二.GB5009.154-2016食品中維生素B6的測(cè)定
1.定義
維生素B6(Vita分鐘B6)又稱吡哆素,其包括吡哆醇.吡哆醛及吡哆胺,在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在,是一種水溶性維生素,遇光或堿易破壞,不耐高溫.1936年定名為維生素B6.維生素B6為無(wú)色晶體,易溶于水及乙醇,在酸液中穩(wěn)定,在堿液中易破壞,吡哆醇耐熱,吡哆醛和吡哆胺不耐高溫.維生素B6在酵母菌.肝臟.谷粒.肉.魚.蛋.豆類及花生中含量較多.維生素B6為人體內(nèi)某些輔酶的組成成分,參與多種代謝反應(yīng),尤其是和氨基酸代謝有密切關(guān)系.臨床上應(yīng)用維生素B6制劑防治妊娠嘔吐和放射病嘔吐.
2.本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T5009.154-2003《食品中維生素B6的測(cè)定》.GB5413.13-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測(cè)定》.
3.第二法微生物法
①原理
食品中某一種細(xì)菌的生長(zhǎng)必須要有某一種維生素的存在,卡爾斯伯酵母菌在有維生素B6存在的條件下才能生長(zhǎng),在一定條作下維生素B6的量與其生長(zhǎng)呈正比關(guān)系.用比濁法測(cè)定該菌在試樣液中生長(zhǎng)的渾濁度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較得出試樣中維生素B6的含量.
②涉及培養(yǎng)基種類：
12309吡哆醇Y培養(yǎng)基
12309-1吡哆醇Y瓊脂培養(yǎng)基
11154麥芽浸粉瓊脂培養(yǎng)基
11170-1YM肉湯培養(yǎng)基
11171-1YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基
③培養(yǎng)基涉及流程詳解
菌種的制備及保存(避光處理)
菌種復(fù)壯:卡爾斯伯酵母,ATCC#9080菌種或等效菌種凍干品,加入約0.5毫升YM肉湯培養(yǎng)基或生理鹽水復(fù)溶,取幾滴復(fù)溶的菌液分別接種2支裝有10毫升YM肉湯培養(yǎng)基的試管中,于30攝氏度水浴振蕩培養(yǎng)20h至24h.
月儲(chǔ)備菌種制備:將菌種復(fù)壯培養(yǎng)液劃線接種于YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基(傳代培養(yǎng)基)斜面上,于30攝氏度培養(yǎng)20h至24h,于2攝氏度至8攝氏度冰箱內(nèi)保存,此菌種為第一代月儲(chǔ)備菌種;以后每月將上一代的月儲(chǔ)備菌種劃線接種于YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基(傳代培養(yǎng)基)斜面,于30攝氏度培養(yǎng)20h至24h,于2攝氏度至8攝氏度冰箱內(nèi)保存,有效期一個(gè)月,此菌種為當(dāng)月儲(chǔ)備菌種.
周儲(chǔ)備菌種制備:每周從當(dāng)月儲(chǔ)備菌種接種于YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基(傳代培養(yǎng)基)斜面,于30攝氏度培養(yǎng)20h至24h,于2攝氏度至8攝氏度冰箱內(nèi)保存,有效期7d.保存數(shù)星期以上的菌種,不能立即用作制備接種液之用,一定要在使用前每天移種一次,連續(xù)2d至3d,方可使用,否則生長(zhǎng)不好.
接種菌懸液制備:在維生素B6測(cè)定實(shí)驗(yàn)前一天,將周儲(chǔ)備菌種轉(zhuǎn)接于10毫升YM肉湯培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)液)中,可同時(shí)制備2管,于30攝氏度振蕩培養(yǎng)20h至24h,得到測(cè)定用的種子培養(yǎng)液,從月儲(chǔ)備菌種到種子培養(yǎng)液總代數(shù)不超過(guò)5代.將該種子培養(yǎng)液于3000r/分鐘下離心10分鐘,傾去上清液;用10毫升生理鹽水洗滌,離心,傾去上清液,用生理鹽水重復(fù)洗滌2次;再加10毫升消毒過(guò)的生理鹽水,將離心管置于渦旋混勻器上充分混合,使菌種成為混懸液,將此菌懸液倒入已消毒的注射器內(nèi),立即使用.
試樣處理
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:3組試管各加0.00毫升.0.02毫升.0.04毫升.0.08毫升.0.12毫升和0.16毫升吡哆醇工作液,再加吡哆醇Y培養(yǎng)基補(bǔ)至5.00毫升,混勻,加棉塞.
試樣管的制備:在試管中分別加入0.05毫升.0.10毫升.0.20毫升樣液,再加入吡哆醇Y培養(yǎng)基補(bǔ)至5.00毫升,用棉塞塞住試管,將制備好的標(biāo)準(zhǔn)曲線和試樣測(cè)定管放入高壓釜121攝氏度下高壓滅菌10分鐘,冷至室溫備用.