土壤中芽孢桿菌的分離

發(fā)布時間：

2022-12-27

作者：

脫水干粉培養(yǎng)基

土壤中芽孢桿菌的分離

一實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容

目的:掌握用平板稀釋法分離得到微生物純種的方法

內(nèi)容:分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌

二實驗原理

在自然界中,各種微生物幾乎都是雜居在一起的.為了從混雜的樣品中取得所需的純種,或把受雜菌污染的菌種重新分離出來,都離不開分離純化方法.所以,分離純化是微生物學實驗中最基本的技術(shù)之一.

純化分離方法很多,歸納起來可分為兩大類:一是單細胞（或單孢子）；另一是單菌落分離.后者因方法簡便,且不需要特殊儀器設(shè)備,所以是一類常用的方法.

通過形成單菌落獲得純種的方法很多,對于好氧菌及兼性厭氧菌可采用平板劃線法平板表面涂片法或澆注平板法等,其中最簡便的是平板劃線分離法.平板劃線是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞,通過在分區(qū)的平板上作多次劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞,以培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落,通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種.有時這種單菌落并非都由單個細胞繁殖而來的,故必須反復分離多次才能得到純種.稀釋平板法又可分為澆注平板法和平板表面涂布法兩種.澆注平板法是將待分離的樣品用合適的稀釋液作一系列稀釋后,從適當?shù)南♂屢褐?取一定量的菌液加至無菌培養(yǎng)皿中,立即倒入融化驗的固體培養(yǎng)基,迅速搖動,使培養(yǎng)基與菌液充分混勻,置合適的溫度下培養(yǎng)一段時間,在平板培養(yǎng)基的表面和內(nèi)層就會出現(xiàn)若干分散的單菌落,然后把典型的單菌落分別挑到斜面上就成為純種.平板表面涂布法是指取一定量的稀釋菌液,于適合該菌生長的平板培養(yǎng)基表面上,然后用無菌的涂布玻棒,把菌液的均勻地涂布在整個平板上,經(jīng)培養(yǎng)后,在平板培養(yǎng)基表面便形成了若干分散的單菌落,然后分別挑取典型的單菌落于斜面培養(yǎng)基上,經(jīng)培養(yǎng)后即成為純化菌種.若長出的菌落不典型或還混有雜菌,則可如法重復分離幾次即可達到純化的目的.

三實驗材料和用具

試劑:牛肉膏蛋白胨淀粉培養(yǎng)基無菌水

器材:無菌培養(yǎng)皿無菌試管無菌吸管恒溫箱等

四操作步驟

分離淀粉酶的芽孢桿菌——平板稀釋分離法

采集土樣廚房蔬菜地土壤于40-60℃烘干研細

準備無菌培養(yǎng)皿6套（10-2 10-3 10-4兩個重復）,貼標鑒

熔化培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨淀粉培養(yǎng)基冷卻至50℃待用）

分裝無菌水三管,每管4.5ml,并采用逐級稀釋法稀釋土樣

取樣取0.5 ml土樣稀釋液放入相應(yīng)編號的培養(yǎng)基內(nèi)放.

倒培養(yǎng)基搖勻平放待凝.

于37℃倒置培養(yǎng)24`48小時.