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微生物實(shí)驗(yàn)室常見20種培養(yǎng)基配方

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

作者：

微生物培養(yǎng)基的配方

微生物實(shí)驗(yàn)室常見20種培養(yǎng)基配方

一、糖發(fā)酵管

成分：

牛肉膏 5克,蛋白胨 10克,氯化鈉 3克,磷酸氫二鈉 2克,0.2％滇麝香草酚藍(lán)溶液 12毫升,蒸餾水 1000毫升,PH 7.4

制法

1. 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

2. 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶1000 毫升，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。另將各種糖類分別配好10%溶液，同時(shí)高壓滅菌。將5毫升糖溶液加入于100 毫升培養(yǎng)基內(nèi)，以無菌操作分裝小試管。

注：

蔗糖不純，加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過濾法除菌。

試驗(yàn)方法：

從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36攝氏度±1攝氏度培養(yǎng)，一般觀察2～3d。遲緩反應(yīng)需觀察14~30d。

二、乳糖膽鹽發(fā)酵管

成分：

蛋白胨 20克,豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5克,乳糖 10克,0.04%滇甲酚紫水溶液 25毫升,蒸餾水 1000毫升

制法：將蛋白胨，膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10 毫升，并放入一個(gè)小倒管，115攝氏度高壓滅菌15分鐘。

注：

雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。

三、5％乳糖發(fā)酵管

成分：

蛋白胨 0.2克,氯化鈉 0.5克,乳糖 5克,2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液 1.2毫升,蒸餾水 100毫升,pH 7.4

制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50毫升蒸餾水內(nèi)，校正pH。將乳糖溶解于另外50毫升蒸餾水內(nèi)，分別滅菌121 攝氏度 15分鐘，將兩液混合，以無菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi)。

注：

在此培養(yǎng)基內(nèi)，大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于ld內(nèi)發(fā)酵。

四、緩沖葡萄糖蛋白胨水（MR和VP試驗(yàn)用）

成分：

磷酸氫二鉀 5克,多胨 7克,葡萄糖 5克,蒸餾水 1000毫升

制法：溶化后校正pH，分裝試管，每管1毫升，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

甲基紅（MR）試驗(yàn)：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1攝氏度培養(yǎng)2～5d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25攝氏度培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽性，黃色為陰性，甲基紅試劑配法：10毫克甲基紅溶于30毫升95％乙醇中，然后加入20 毫升蒸餾水。

V-P試驗(yàn)：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1攝氏度培養(yǎng)2～4d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25攝氏度培養(yǎng)。加入6％α-萘酚-乙醇溶液0.5毫升和40％氫氧化鉀溶液0.2毫升充分振搖試管，觀察結(jié)果陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應(yīng)放在36±1攝氏度下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。

五、營養(yǎng)明膠

成分：

蛋白胨 5克,牛肉膏 3克,明膠 120克,蒸餾水 1000毫升,pH 6.8~7.0

制法：加熱溶解，校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121攝氏度高壓滅菌10分鐘，取出后迅速冷卻，使其凝固，復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8～7.0。

試驗(yàn)方法：

用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種，放在22～25攝氏度培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果，記錄液化時(shí)間。或放在36士1攝氏度培養(yǎng)，每天取出，放冰箱內(nèi)30分鐘后再觀察結(jié)果。

六、苯丙氨酸培養(yǎng)基

成分：

酵母浸膏 3克,DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1克）2克,磷酸氫二鈉 1克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000毫升

制法：加熱溶解后分裝試管，121攝氏度高壓滅菌15分鐘，使成斜面。

試驗(yàn)方法：

自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在36士1攝氏度培養(yǎng)4h或18～24h，滴加10％三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。

七、蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗(yàn)用）

成分：

蛋白胨（或胰蛋白胨）20克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4

制法：按上述成分配制，分裝小試管，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

靛基質(zhì)試劑

柯凡克試劑：將5克對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75毫升戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25毫升。

歐-波試劑：將1克對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95毫升95%乙醇內(nèi)，然后緩慢加入濃鹽酸20 毫升。試驗(yàn)方法：挑取小量培養(yǎng)物接種，在36士1攝氏度培養(yǎng)1～2d，必要時(shí)可培養(yǎng)4～5d。加入柯凡克試劑約0.5毫升，輕搖試管，陽性者于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約0.5 毫升，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。

注：

蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。

八、硫酸亞鐵瓊脂（硫化氫試驗(yàn)用）

成分：

牛肉膏 3克,酵母浸膏 3克,蛋白胨 10克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000 毫升

制法：加熱溶解，校正pH，分裝試管，115攝氏度高壓滅菌15分鐘，取出直立候其凝固。

試驗(yàn)方法：

挑取瓊脂培養(yǎng)物，沿管壁穿刺，于36士1攝氏度培養(yǎng)1～2d，觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏?/span>

注：

腸桿菌科細(xì)菌測(cè)定硫化氫的產(chǎn)生，應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。

九、尿素瓊脂

成分：

蛋白胨 1克,氯化鈉5克葡萄糖1克,磷酸二氫鉀 2克,4%酚紅溶液 3 毫升,瓊脂 20克,蒸餾水 1000 毫升,20%尿素溶液 100毫升

制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121攝氏度高壓滅菌15分鐘。冷至50～55攝氏度，加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液，尿素的最終濃度為2％，最終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?/span>

試驗(yàn)方法：

挑取瓊脂培養(yǎng)物接種，在36士1攝氏度培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

十、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基

成分：

蛋白胨10克,氯化鈉 5克,磷酸二氫鉀 0.225克,磷酸氫二鈉 5.64克,蒸餾水 1000 毫升,0.5%氰化鉀溶液 20 毫升,pH 7.6

制法：將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100 毫升培養(yǎng)基加入0.5％氰化鉀溶液2.0毫升（最后濃度為1：10000），分裝于12mm*100mm滅菌試管，每管約4毫升，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4攝氏度冰箱內(nèi)，至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，分裝試管備用。

十一、營養(yǎng)瓊脂

成分：

蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化鈉5克,瓊脂15～20克,蒸餾水1000毫升

制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2毫升，校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化分裝燒瓶，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

注：

此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計(jì)數(shù)，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。

十二、營養(yǎng)肉湯

成分：

蛋白胨 10克,牛肉膏 3克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4

制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225 毫升，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

十三、緩沖蛋白胨水（BP）

成分：

蛋白胨 10克,氯化鈉 5克,磷酸氫二鈉 9克,磷酸二氫鉀 1.5克,蒸餾水1000毫升,pH 7.2

制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。臨用時(shí)無菌分裝每瓶225毫升。

注：本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。

注：

本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。

十四、EC肉湯

成分：

胰蛋白胨 20克,3號(hào)膽鹽（或混合膽鹽）1.5克,乳糖 5克,磷酸氫二鉀 4克,磷酸二氫鉀 1.5克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升

制法：將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。最終pH為6.9±0.2。

十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

多胨或眎胨 5克,膽鹽 1克,碳酸鈣 10克,硫代硫酸鈉 3克,蒸餾水 1000毫升,碘溶液碘 6克,碘化鉀 5克,蒸餾水 20 毫升

制法：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100毫升。分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖，使其中的碳酸鈣混勻，121攝氏度高壓滅菌15分鐘備用。臨用時(shí)每100毫升基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2毫升，,0.1%煌綠溶液1毫升。

十六、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）

成分：

蛋白胨 5克,乳糖 4克,亞硒酸氫鈉 4克,磷酸氫二鈉 5.5克,磷酸二氫鉀 4.5克,L-胱氨酸 0.01克,蒸餾水 1000毫升

1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱取L-胱氨酸0.1克或（DL-胱氨酸0.2克），加1mol/L氫氧化鈉1.5毫升，使溶解，再加入蒸餾水8.5毫升即成。

制法：將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900毫升蒸餾水中，加熱煮沸，候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100毫升蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1毫升。

分裝于滅菌瓶中．每瓶100毫升，pH應(yīng)為7.0±0.1。

十七、亞硫酸鉍瓊脂（BS）

成分：

蛋白胨 10克,牛肉膏 5克,葡萄糖 5克,硫酸亞鐵 0.3克,磷酸氫二鈉 4克,煌綠 0.025克,檸檬酸鉍銨 2克,亞硫酸鈉 6克,瓊脂 18~20克,蒸餾水 1000毫升,pH 7.5

制法：

1.將前面5種成分溶解于300毫升蒸餾水中。

2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50毫升蒸餾水溶解。