控制菌檢查法——耐膽鹽革蘭氏陰性菌
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
2015版藥典中非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查:控制菌檢查法——耐膽鹽革蘭氏陰性菌
該檢查項(xiàng)下收載了“定性試驗(yàn)”和“定量試驗(yàn)”兩部分內(nèi)容,若標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為“不得檢出耐膽鹽革蘭氏陰性菌”,則選擇“定性試驗(yàn)”檢驗(yàn)；若標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為“膽鹽革蘭氏陰性菌應(yīng)小于10n cfu/g(ml)”,則選擇“定量試驗(yàn)”檢驗(yàn).
耐膽鹽革蘭氏陰性菌的檢驗(yàn)流程:樣品制備成1:10的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)供試液后,先在20~25℃預(yù)培養(yǎng)不超過(guò)2小時(shí)使細(xì)菌復(fù)蘇但不增殖,再進(jìn)行選擇性增菌,最后通過(guò)VRBG篩選耐膽鹽革蘭氏陰性菌.
預(yù)培1:10TSB20-25攝氏度小于等于2小時(shí)；
選擇性增菌 定性:取相當(dāng)于1g至NmlEE；定量:取相當(dāng)于0.1g,0.01g,0.001g至NmlEE；培養(yǎng)條件:30-35攝氏度,24-25小時(shí)；
分離 BRBG 30-35攝氏度,18-24小時(shí).
腸道增菌液體培養(yǎng)基(EE)對(duì)革蘭氏陰性菌具有良好的選擇性,經(jīng)EE選擇性增菌后革蘭氏陽(yáng)性菌應(yīng)不生長(zhǎng),故若在隨后的紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂上無(wú)菌生長(zhǎng),則表明樣品中未污染有耐膽鹽革蘭氏陰性菌.盡管藥典未明確說(shuō)明VRBG培養(yǎng)基的抑菌能力,但該培養(yǎng)基通過(guò)脫氧膽酸鈉和結(jié)晶紫等成分仍對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌具有較強(qiáng)的抑制能力.因此,若VRBG瓊脂上有菌生長(zhǎng),且經(jīng)革蘭氏染色判斷為革蘭氏陰性菌,則表明樣品已被耐膽鹽革蘭氏陰性菌污染；若為革蘭氏陽(yáng)性菌,則反映培養(yǎng)體系的選擇性抑菌能力不足.
腸道菌增菌液體培養(yǎng)基(12722-1)
一,配方:g/L
明膠胰酶水解物10.0g
葡萄糖5.0g
二水合磷酸氫二鈉 8.0g
磷酸二氫鉀 2.0g
牛膽鹽20.0g
亮綠 0.015g
pH7.2±0.2 (25℃)
二,配制方法:
稱取本品45.0g于1L蒸餾水或去離子水中(可按比例增加或減少配制量),沸水浴煮沸30分鐘,冷卻至常溫備用.
三,作用:用于耐膽鹽革蘭陰性菌的選擇性增菌
四,原理:
明膠胰酶水解物提供蛋白質(zhì),維生素和氨基酸;葡萄糖提供碳源;磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀為緩沖劑;牛膽鹽和亮綠為選擇性抑菌劑,抑制非腸桿菌科細(xì)菌的生長(zhǎng).
五,產(chǎn)品外觀:
脫水干粉培養(yǎng)基:淡黃色粉末
培養(yǎng)基溶解后:綠色溶液,澄清透明.
六,生長(zhǎng)圖片
紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(12719-1)
1 配方:g/L
酵母浸出粉 3.0g
明膠胰酶水解物7.0g
葡萄糖10.0g
氯化鈉5.0g
脫氧膽酸鈉 1.5g
中性紅0.03g
結(jié)晶紫0.002g
瓊脂15.0g
pH7.4±0.2(25℃)
2 配制方法:
稱取本品41.5g于1L蒸餾水或去離子水中,攪拌煮沸溶解1分鐘,冷卻至50—55℃傾注平板.
3 作用:用于耐膽鹽革蘭陰性菌的選擇性分離
4 原理:
明膠胰酶水解物和酵母浸出粉提供碳氮源和微量元素;葡萄糖是可發(fā)酵的糖類;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;脫氧膽酸鈉和結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽(yáng)性菌,特別抑制革蘭氏陽(yáng)性桿菌和糞腸球菌;中性紅為pH指示劑.
5 產(chǎn)品外觀
脫水干粉培養(yǎng)基:土黃色粉末
滅菌后融化狀態(tài)培養(yǎng)基::淡紅色,無(wú)不溶物
平板凝膠培養(yǎng)基:紅色凝膠
6 生長(zhǎng)圖片