生物指示菌片無菌檢驗(yàn)規(guī)范
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
生物指示菌片無菌檢驗(yàn)規(guī)范
目的:規(guī)定滅菌工序質(zhì)量監(jiān)測點(diǎn)的檢驗(yàn)方法,有效的控制該工序質(zhì)量.
范圍:本方法適用于滅菌工序生物指示菌片的無菌檢驗(yàn).
檢驗(yàn)方法原理:將枯草桿菌黑色變種芽胞菌片置培養(yǎng)基內(nèi),在一定的溫度下培養(yǎng),觀察細(xì)菌是否生長.
在配制培養(yǎng)基前,先配少量培養(yǎng)基觀察其滅菌后是否有渾濁,長菌情況是否良好,合格后方可大量配制.在更換廠牌號(hào)時(shí)應(yīng)重試.
制備各種培養(yǎng)基時(shí),可用2mol/L鹽酸或2mol/L氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)PH值,使滅菌后的PH值在規(guī)定范圍內(nèi).
營養(yǎng)肉湯的配制：按瓶裝上的說明書要求配制,溶解,攪拌均勻,每支試管分裝15-20培養(yǎng)基,滅菌.
在使用前,培養(yǎng)基須經(jīng)35±2培養(yǎng)48h.
制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25、避光的環(huán)境.培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中,一般在三周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中,一般可在一年內(nèi)使用.
儀器與設(shè)備:超凈工作臺(tái)、高壓蒸氣滅菌器、9cm直徑雙碟、鑷子、剪刀.
試驗(yàn)前準(zhǔn)備
器具滅菌:與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠的方法滅菌,置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121 30mim,或置電熱干燥箱內(nèi)160 2h.
無菌室要求
無菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)局部應(yīng)符合潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域要求.無菌室內(nèi)除定期用甲醛加高錳酸鉀(或甲醛蒸汽)消毒外,每次操作前用75%灑精或消毒溶液擦試工作臺(tái)面及一些可能污染的死角.用紫外燈殺菌至少30分鐘.在每次操作完畢后,同樣用上述液體擦試工作面. 無菌室在消毒處理完畢后,應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù),方法如下：取內(nèi)徑90mm雙碟,無菌操作注入融化的大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基20ml,制成平板,先在30～35培養(yǎng)48h證明無菌后,取雙碟平板3只,在無菌室操作臺(tái)內(nèi)平均放置,打開碟蓋,暴露30mim后蓋好,置30～35培養(yǎng)48h后取出檢查,3只雙碟上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個(gè).無菌試驗(yàn)過程中也需要檢查無菌室的菌落數(shù),方法同上.在試驗(yàn)開始進(jìn)行時(shí),打開碟蓋,至試驗(yàn)結(jié)束蓋好,照上法培養(yǎng),應(yīng)符合上述要求.
試驗(yàn)方法
按無菌操作法,每一滅菌柜將已滅菌的菌片(枯草桿菌黑色變咱芽胞Atcc9372,含菌量2.4×106)分別接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(1個(gè)菌片/管),另取2管營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,1管接種1個(gè)未滅菌的菌片,供作陽性對(duì)照,另1管作為陰性對(duì)照.接種后,上述接種后的培養(yǎng)基按規(guī)定的溫度培養(yǎng)7天.
結(jié)果判定
如培養(yǎng)基均為澄清的藍(lán)色或顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長,判定為合格.如培養(yǎng)基中任何一管藍(lán)色消失、顯渾濁或有菌膜并確證為有菌生長,判定為不合格.監(jiān)測結(jié)果只有在陽性對(duì)照的生物指示劑有菌生長時(shí)才有效.除陽性對(duì)照管外,其他各管均不得有菌生長,否則應(yīng)判為不合格.如果出現(xiàn)陽性結(jié)果,增加生物指示劑放置數(shù)量和位置點(diǎn)數(shù),重復(fù)滅菌周期.如果再次出現(xiàn)陽性結(jié)果,對(duì)滅菌柜、操作過程等相關(guān)因素進(jìn)行調(diào)查.