乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學(xué)檢驗
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學(xué)檢驗
主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗的技術(shù)要求.ATCC菌種
本標(biāo)準(zhǔn)適用于以鮮乳、乳粉或輔以大豆等為原料,經(jīng)乳酸菌發(fā)酵加工制成的具有相應(yīng)風(fēng)味的活性乳酸菌飲料.
引用標(biāo)準(zhǔn)
GB 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 染色法、培養(yǎng)基和試劑
術(shù)語
乳酸菌:一群能分解葡萄糖或乳糖產(chǎn)生乳酸,需氧和兼性厭氧,多數(shù)無動力,過氧化氫酶陰性,革蘭氏陽性的無芽胞桿菌和球菌.乳酸菌菌落總數(shù):檢樣在一定條件下培養(yǎng)后,所得1毫升檢樣中所含乳酸菌菌落的總數(shù).
設(shè)備和材料
溫箱:36±1,冰箱:0～4,恒溫水浴:46±1,電爐:可調(diào)式,吸管:容量為1,10和25毫升,廣口瓶或三角瓶:容量為500毫升,平皿:直徑為9cm,試管:18×180mm,顯微鏡.
培養(yǎng)基和試劑
改良TJA培養(yǎng)基(改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基),改良MC培養(yǎng)基(Modified Chalmers培養(yǎng)基),0.1%美蘭牛乳培養(yǎng)基,6.5%氯化鈉肉湯,pH9.6葡萄糖肉湯,40%膽汁肉湯,淀粉水解培養(yǎng)基,精氨酸水解培養(yǎng)基,乳酸桿菌糖發(fā)酵管,七葉苷培養(yǎng)基,革蘭氏染色液:按GB 4789.28規(guī)定執(zhí)行,3%過氧化氫溶液:按GB 4789.28規(guī)定執(zhí)行,蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑:按GB 4789.28規(guī)定執(zhí)行,明膠培養(yǎng)基:按GB 4789.28規(guī)定執(zhí)行,硝酸鹽培養(yǎng)基、硝酸鹽試劑:按GB 4789.28規(guī)定執(zhí)行,生理鹽水:定量分裝于三角瓶和試劑管內(nèi)滅菌.
乳酸菌菌落總數(shù)的測定
操作步驟
以無菌操作將經(jīng)過充分搖勻的檢樣25毫升(或25g)放入含有225毫升滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶內(nèi)作成110的均勻稀釋液.用1毫升滅菌吸管吸取110稀釋液1毫升,沿管壁徐徐注入含有9毫升滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液).另取1毫升滅菌吸管,按上述操作順序,作10倍遞增稀釋液,如此每遞增一次,即換用1支1毫升滅菌吸管.選擇2～3個以上適宜稀釋度,分別在作10倍遞增稀釋的同時,即以吸取該稀釋度的吸管移1毫升稀釋液于滅菌平皿內(nèi),每個稀釋度作兩個平皿.稀釋液移入平皿后,應(yīng)及時將冷至50的乳酸菌計數(shù)培養(yǎng)基(改良TJA或改良MC)注入平皿約15毫升,并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻.同時將乳酸菌計數(shù)培養(yǎng)基傾入加有1毫升稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內(nèi)作空白對照,以上整個操作自培養(yǎng)物加入培養(yǎng)皿開始至接種結(jié)束須在20分鐘內(nèi)完成.待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,置36±1溫箱內(nèi)培養(yǎng)72±3h取出,觀察乳酸菌菌落特征(見表1),選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計數(shù).計算后,隨機(jī)挑取5個菌落數(shù)進(jìn)行革蘭氏染色,顯微鏡檢查并做過氧化氫酶試驗.革蘭氏陽性,過氧化氫酶陰性,無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌.根據(jù)證實為乳酸菌菌落計算出該皿內(nèi)的乳酸菌數(shù),然后乘其稀釋倍數(shù)即得每毫升樣品中乳酸菌數(shù).
乳酸菌的鑒定
對上述分離到的乳酸菌需進(jìn)行菌種鑒定時,則作以下試驗.
菌種制備:自平板上挑取菌落,接種于改良TJA或改良MC瓊脂斜面,于36±1,24～48h培養(yǎng),刮取菌苔,分別進(jìn)行下列試驗.乳酸桿菌鑒定試驗:極少見還原硝酸鹽,不液化明膠,不產(chǎn)生靛基質(zhì)和硫化氫.常見乳桿菌屬內(nèi)種的碳水化合物反應(yīng),見表2.產(chǎn)乳酸的鏈球菌的鑒別試驗,見表3.常見乳桿菌屬內(nèi)種的碳水化合物反應(yīng)（表略）