食品微生物學(xué)檢驗——乳酸菌檢驗

發(fā)布時間：

2022-12-27

作者：

GB4789.35-2016食品微生物學(xué)檢驗——乳酸菌檢驗

變更內(nèi)容:本標(biāo)準(zhǔn)代替GB4789.35—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗乳酸菌檢驗》,SN/T1941.1—2007《進(jìn)出口食品中乳酸菌檢驗方法第1部分:分離與計數(shù)方法》.本標(biāo)準(zhǔn)與GB4789.35—2010相比,主要變化如下:

增加了乳酸菌總數(shù)計數(shù)培養(yǎng)條件的選擇及結(jié)果說明;

修改了改良MRS培養(yǎng)基成分;

修改了平板計數(shù)的接種方法和接種量.

適用范圍:本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了含乳酸菌食品中乳酸菌的檢驗方法.

本標(biāo)準(zhǔn)適用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的檢驗.

乳酸菌:一類可發(fā)酵糖主要產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的通稱.本標(biāo)準(zhǔn)中乳酸菌主要為乳桿菌屬(Lactobacillus),雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)和嗜熱鏈球菌屬(Streptococcus).

操作步驟:

一,樣品制備

無菌操作生理鹽水+無菌均質(zhì)杯/無菌均質(zhì)袋/無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)

二,樣品稀釋

三,乳酸菌計數(shù)

1,乳酸菌總數(shù)

乳酸菌總數(shù)計數(shù)培養(yǎng)條件的選擇及結(jié)果說明

樣品中所包括乳酸菌菌屬	培養(yǎng)條件的選擇及結(jié)果說明
僅包括雙歧桿菌屬	按GB4789.34 的規(guī)定執(zhí)行
僅包括乳桿菌屬	按4操作
僅包括嗜熱鏈球菌	按3操作
同時包括雙歧桿菌屬和乳桿菌屬	1 ) 按照4 操作。結(jié)果即為乳酸菌總數(shù); 2 ) 如需單獨計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目,按照2操作
同時包括雙歧桿菌屬和嗜熱鏈球菌	1 ) 按照2 和3 操作,二者結(jié)果之和即為乳酸菌總數(shù); 2 ) 如需單獨計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目,按照6. 2. 3. 2 操作
同時包括乳桿菌屬和嗜熱鏈球菌	1 ) 按照3 和4 操作,二者結(jié)果之和即為乳酸菌總數(shù); 2 ) 3 結(jié)果為嗜熱鏈球菌總數(shù); 3 ) 4 結(jié)果為乳桿菌屬總數(shù)
同時包括雙歧桿菌屬、乳桿菌屬和嗜熱鏈球菌	1 ) 按照3 和4 操作,二者結(jié)果之和即為乳酸菌總數(shù); 2 ) 如需單獨計數(shù)雙歧桿菌屬數(shù)目,按照2 操作

2,雙歧桿菌計數(shù)

根據(jù)對待檢樣品雙歧桿菌含量的估計,選擇2個至3個連續(xù)的適宜稀釋度,每個稀釋度吸取1毫升樣品勻液于滅菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿.稀釋液移入平皿后,將冷卻至48攝氏度的莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良的MRS培養(yǎng)基傾注入平皿約15毫升,轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻.36攝氏度±1攝氏度厭氧培養(yǎng)72h±2h,培養(yǎng)后計數(shù)平板上的所有菌落數(shù).從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成.

3,嗜熱鏈球菌計數(shù)

根據(jù)待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數(shù)的估計,選擇2個至3個連續(xù)的適宜稀釋度,每個稀釋度吸取1毫升樣品勻液于滅菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿.稀釋液移入平皿后,將冷卻至48攝氏度的MC培養(yǎng)基傾注入平皿約15毫升,轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻.36攝氏度±1攝氏度需氧培養(yǎng)72h±2h,培養(yǎng)后計數(shù).嗜熱鏈球菌在MC瓊脂平板上的菌落特征為:菌落中等偏小,邊緣整齊光滑的紅色菌落,直徑2mm±1mm,菌落背面為粉紅色.從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成.

4,乳桿菌計數(shù)

根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計,選擇2個至3個連續(xù)的適宜稀釋度,每個稀釋度吸取1毫升樣品勻液于滅菌平皿內(nèi),每個稀釋度做兩個平皿.稀釋液移入平皿后,將冷卻至48攝氏度的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注入平皿約15毫升,轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻.36攝氏度±1攝氏度厭氧培養(yǎng)72h±2h.從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成.

四,乳酸菌的鑒定

1,純培養(yǎng)

挑取3個或以上單個菌落,嗜熱鏈球菌接種于MC瓊脂平板,乳桿菌屬接種于MRS瓊脂平板,置36攝氏度±1攝氏度厭氧培養(yǎng)48h

2,鑒定

1)雙歧桿菌的鑒定按GB4789.34的規(guī)定操作2)

培養(yǎng)基:

11304MRS培養(yǎng)基

11305MC培養(yǎng)基

21302莫匹羅星鋰鹽儲備液1毫升×10支/盒

21104-2半胱氨酸鹽酸鹽溶液0.05g×10支/盒

21311七葉苷發(fā)酵管1毫升×10支/盒

213030.5%蔗糖發(fā)酵管1毫升×10支/盒