耶爾森氏菌概念特性和檢驗(yàn)方法

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

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耶爾森氏菌概念特性和檢驗(yàn)方法

耶爾森氏菌屬包括11個(gè)種,其中對(duì)人有致病性的有三種：小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、假結(jié)核菌和鼠疫菌.只有小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌和假結(jié)核菌已確定是食源性病原體.鼠疫耶爾森氏菌引起黑疽病,不通過食品傳染.

一、生物學(xué)特性

1、形態(tài)特性:本菌為革蘭氏陰性桿菌或球桿菌,大小為1-3.5×0.5-1.3μm,多單個(gè)散在,有時(shí)排列成短鏈或成堆.本菌不形成芽胞,無莢膜,有周鞭毛;但其鞭毛在30攝氏度以下培養(yǎng)條件形成,溫度較高時(shí)即喪失,因此表現(xiàn)為30攝氏度以下有動(dòng)力,而35攝氏度以上則無動(dòng)力.

2、培養(yǎng)特性:本菌生長溫度為30-37攝氏度,但在22-29攝氏度才能使本菌的某些特性出現(xiàn).4攝氏度時(shí)能保存和繁殖.本菌世代時(shí)間長,最短亦需40分鐘左右.在SS或麥康凱瓊脂上于25攝氏度經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng),菌落細(xì)小,至48小時(shí)直徑才增大成0.5-3.0毫米.菌落圓整、光滑、濕潤、扁平或稍隆起,透明或半透明;在麥康凱瓊脂上菌落淡黃色,如若微帶紅色,則菌落中心的紅色常稍深.本菌在肉湯中生長呈均勻混濁,一般不形成菌膜.

3、生化特性

本菌的生化特性及其與近緣菌的鑒別

4、生物型

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的生物型分類方法有幾種,目前FDA細(xì)菌分析手冊(cè)第八版中采用的是Wanters 1981的分型方法.

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的生物型

V 表示可變反應(yīng) C 在日本發(fā)現(xiàn)血清型為0:3的生物型

5、血清型:小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌菌株根據(jù)其耐熱性和耐受高壓滅菌的菌體抗原能被血清學(xué)分型.Wanters將小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌和相關(guān)菌歸納為54個(gè)血清群,Aleksii和Bockemuh等人提議將小腸耶氏菌的血清群簡化為18個(gè)群.目前下列血清群的致病菌株已通過鑒定,它們是0:1,2a,3;0:2a,3;0:3;0:8;0:9;0:4,32;0:5,27;0:12,25;0:13a,13b;0:19;0:20;0:21.引起人類疾病的主要血清群是0:3,0:8,0:9和0:5,27.

二、流行病學(xué)

1、細(xì)菌分布:小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分布很廣,可存在于生的蔬菜、乳和乳制品、肉類、豆制品、沙拉、牡蠣、哈和蝦.也存在于環(huán)境中,如湖泊、河流、土壤和植被.已從家畜、狗、貓、山羊、灰鼠、水貂和靈長類動(dòng)物的糞便中分離出該菌.在港灣周圍,許多鳥類包括水禽和海鷗可能是帶菌者.

豬的帶菌率較高,日本報(bào)告檢出率為4%,加拿大為3.6%,丹麥為10-17%.在豬中,該菌最易在扁桃腺中發(fā)現(xiàn).

本菌對(duì)易染人群為嬰幼兒,常引起發(fā)熱、腹痛和帶血的腹瀉.

三、致病性

1、腸毒素:該菌能產(chǎn)生耐熱性腸毒素,(分子量為10000-50000),能耐熱121攝氏度30分鐘,能在4攝氏度保存7個(gè)月,pH1-11中穩(wěn)定.但腸毒素的產(chǎn)生僅限于22-25攝氏度.血清型03、08和09幾乎經(jīng)常產(chǎn)生腸毒素,在其他血清型中也有產(chǎn)生腸毒素的菌株.該腸毒素被攝入即可引起發(fā)病.

2、侵襲性:Hela細(xì)胞感染,血清型O1、O3、O4、O5B、O8、O9、O15、O18、O20、O21和O22都能侵入Hela細(xì)胞,鑒于Hela細(xì)胞感染陽性株多是人類致病的常見血清型,以及從人和動(dòng)物死亡所見腸類的侵入模型,表明Hela細(xì)胞侵入性在小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌腹瀉的發(fā)病機(jī)理上是重要的.

Sereny試驗(yàn),有人將11株小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的菌懸液接種于豚鼠眼結(jié)膜,有6株引起嚴(yán)重的角膜結(jié)膜炎,即Sereny試驗(yàn)陽性.這6株均為O8血清型.

3、自凝性:1980年Laird等人提出了一種測(cè)定本菌毒力的簡易方法,即將試驗(yàn)菌接種于二管含10%小牛血清的組織培養(yǎng)液內(nèi),分別置22攝氏度和36+1攝氏度培養(yǎng),若22攝氏度培養(yǎng),菌液混濁,而37攝氏度培養(yǎng),細(xì)菌凝結(jié),上層液體透明,即為有毒力的菌株,稱為自凝陽性.在檢查的180株菌中有25株陽性,這些陽性菌株均能引起腹瀉.

4、VW抗原:已知該菌的某些菌株具有與鼠疫耶爾森氏菌和假結(jié)核耶爾森氏菌在免疫學(xué)上相同的VW抗原.其在37攝氏度生長時(shí)需要鈣而在25攝氏度生長時(shí)不需要鈣的菌株即含VW抗原.Karmali等人將從病人糞便檢出的O21血清型自凝陽性的菌株,在草酸鎂瓊脂上于35攝氏度培養(yǎng)不生長,用于口服小鼠則產(chǎn)生腹瀉.可見自凝陽性與缺鈣培養(yǎng)基上35攝氏度無生長能力是一致的,能使小鼠發(fā)生腹瀉.

5、毒性質(zhì)粒:耶氏菌病和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌帶有41-48Mdal的質(zhì)粒有關(guān).這被認(rèn)為是毒性質(zhì)粒,即與毒力有關(guān)的質(zhì)粒.有人將失去毒性質(zhì)粒的O8、O3和O9型菌株用小鼠作喂飼試驗(yàn),均不發(fā)病,但用帶毒性質(zhì)粒的O8和O3型菌株試驗(yàn)時(shí),小鼠則均發(fā)生腹瀉或死亡.且菌株自凝試驗(yàn)的結(jié)果與毒性質(zhì)粒的存在與否相一致.

四、檢驗(yàn)與控制

A、增菌

1、無菌稱取25.0g樣品于225毫升,蛋白胨山梨醇膽汁肉湯(PSBB)中,均質(zhì)30秒,置10攝氏度培養(yǎng)10天.

2、如果懷疑產(chǎn)品為高含量耶氏菌,在肉湯培養(yǎng)前各取0.1毫升劃線于麥康凱瓊脂和cefsulodinirgasan新生霉素(CIN)瓊脂.然后取1毫升均質(zhì)液至9毫升 0.5%鹽水(含0.5%KOH)中,混合數(shù)秒鐘,各取0.1毫升劃線麥康凱和CIN瓊脂平板.將平板置30攝氏度培養(yǎng)1天,把平板上生長的菌落轉(zhuǎn)移到Whatmam541濾紙上,用于DNA克隆雜交技術(shù)直接檢測(cè)耶氏菌的致病基因.如果耶氏菌含量較低,省去這一步.

3、將經(jīng)10天培養(yǎng)的增菌肉湯充分混合,轉(zhuǎn)移0.1毫升至1毫升 0.5%鹽水(含0.5%KOH)中,混合5-10秒.連續(xù)劃線于麥康凱平板和CIN平板.另取0.1毫升增菌液至1毫升 0.5%鹽水中,如上在劃線前混合5-10秒.置平板于30攝氏度培養(yǎng)1天.

B、細(xì)菌分離.

檢查經(jīng)1天培養(yǎng)的麥康凱平板,排除紅色或粘液狀菌落,挑取小的(直徑1-2毫米),偏平,無色的或淡粉紅色菌落.同時(shí)檢查CIN平板,挑取具有緊紅色中心整個(gè)邊緣明顯無色的小菌落(直徑1-2毫米).用接種針將所選菌落穿刺接種于賴氨酸精氨酸鐵瓊脂(LAIA)斜面.Christensens尿素瓊脂平板或斜面.膽汁七葉甙瓊脂平板或斜面.室溫培養(yǎng)48小時(shí).在LAIA中的培養(yǎng)物會(huì)產(chǎn)生鹼性斜面,酸性底層,不產(chǎn)生氣體和H2S(KA--)的反應(yīng),被認(rèn)為是尿素酶陽性的可疑耶氏菌.去除在LAIA中產(chǎn)H2S或產(chǎn)氣或尿素酶陰性的培養(yǎng)物.

耶爾森氏菌為兼性厭氧菌,生長溫度為-148攝氏度,能在反復(fù)冷凍,緩化下存活.由于該菌可在4攝氏度下進(jìn)行冷增菌,因此保存在4-5攝氏度冰箱中的食品具有污染的危險(xiǎn).該菌要求較高的水活度,最低水活度為0.95,pH接近中性,較低的耐鹽性.對(duì)加熱、消毒劑敏感.

控制耶爾森氏菌的關(guān)鍵因素包括適當(dāng)?shù)恼糁蠡虬褪蠝缇?適宜的食品處理以防止二次污染.進(jìn)行水處理、合理使用消毒劑等控制措施.

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