埃希氏大腸菌及檢驗

發(fā)布時間：

2022-12-27

作者：

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埃希氏大腸菌及檢驗

一、定義:

大腸埃希氏菌習(xí)慣稱為大腸桿菌,分類于腸桿菌科,歸屬于埃希氏菌屬,并且大腸桿菌株ATCC 11775是該屬的模式菌種.大腸桿菌的不同菌株間DNA相關(guān)性為80%,而與同科的志賀氏菌屬(除鮑氏志賀氏菌外)的DNA相關(guān)性可達(dá)80-87%.與人類疾病有關(guān)的大腸桿菌,統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌(此名稱不易與致病性大腸桿菌相混淆),一般包括五種:即腸毒素性大腸桿菌(ETEC)、致病性大腸桿菌(EPEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)、侵襲性大腸桿菌(EIEC)和粘附性大腸桿菌(EAEC).

二、生物學(xué)特性:

基本形態(tài)特征:

此菌為兩端鈍圓的短小桿菌,一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長條件不同,個別菌體可呈近似球狀或長絲狀.此菌多單獨(dú)存在或成雙,但不呈長鏈狀排列.約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運(yùn)動,但多數(shù)菌體只有1-4根,一般不超過10根,故菌體動力弱;多數(shù)菌株生長有比鞭毛細(xì)、短、直且數(shù)量多的菌毛,有的菌株具有莢膜或微莢膜;不形成芽胞,對普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性.

培養(yǎng)特征:

由于此菌合成代謝能力強(qiáng),在含無機(jī)鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好.最適生長溫度為37攝氏度,在42-44攝氏度條件下仍能生長,生長溫度范圍為15-46攝氏度.在普通營養(yǎng)瓊脂上生長表現(xiàn)3種菌落形態(tài):(1)光滑型: 菌落邊緣整齊,表面有光澤、濕潤、光滑、呈灰色,在生理鹽水中容易分散.(2)粗糙型:菌落扁平、干澀、邊緣不整齊,易在生理鹽水中自凝.(3)粘液型:常為含有莢膜的菌株.此菌兼性厭氧,在有氧條件下生長良好,最適生長pH為6.8-8.0,所用培養(yǎng)基pH為7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0則生長緩慢.

生化反應(yīng)與血清學(xué)反應(yīng)

大腸桿菌屬于衛(wèi)生學(xué)意義的大腸菌群和糞大腸菌群的范疇,因此,必須符合大腸菌群和糞大腸菌群的有關(guān)定義,在檢測大腸菌群、糞大腸菌群的基礎(chǔ)上,可以應(yīng)用I(吲哚)、M(甲基紅)、Vi(3羥基-2-丁酮)、C(檸檬酸)即IMViC生化試驗對大腸桿菌作進(jìn)一步鑒定,其IMViC結(jié)果為++--或-+--.生化反應(yīng)是鑒定大腸桿菌的主要方法之一,然而,大腸桿菌之間生化反應(yīng)的差異非常常見,象:許多菌種非/遲發(fā)酵乳糖,但并不說明它們遺傳上有明顯不同,生化反應(yīng)非典型的大腸桿菌菌株與典型菌株的DNA相關(guān)性在85%-100%.附表1為大腸桿菌生化反應(yīng)特性表.其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG試驗常為選生化反應(yīng),其余為進(jìn)一步的生化試驗.大腸桿菌在賴氨酸脫羧酶、粘質(zhì)酸鹽、醋酸鹽生化試驗中,有一項或多項試驗陽性,且厭氧性生長弱,有動力和吲哚試驗陽性可與志賀氏菌相鑒別.

大腸桿菌的血清學(xué)反應(yīng),往往是對經(jīng)分離、鑒定、確證為大腸桿菌的進(jìn)一步分型,常不作為常規(guī)方法使用.附表2所列主要致瀉性大腸桿菌的血清型.對大腸桿菌的分型鑒定工作,基層檢驗單位若有要求時,可與各地所屬出入境檢驗檢疫局實(shí)驗室聯(lián)系,委托進(jìn)行血清學(xué)鑒定工作.

三、大腸桿菌的抵抗力:

此菌對理化因素的抵抗力,在無芽胞菌中是最強(qiáng)的一種,在室溫可存活數(shù)周,在土壤、水中存活數(shù)月,耐寒力強(qiáng),但是在30分鐘內(nèi)快速冷凍,將37攝氏度降至4攝氏度的過程,可殺死此菌.加熱60攝氏度,30分鐘,此菌可滅活.對漂白粉,酚、甲醛等較敏感,水中1ppb氯可殺死此菌.此菌耐膽鹽,在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用,在選擇性培養(yǎng)基配制上,常利用此菌這一性質(zhì).

四、衛(wèi)生學(xué)意義與流行學(xué)

由于大腸桿菌是人及各種動物腸道中的正常寄居菌,常隨糞便從人及動物體排出,廣泛散播于自然界,所以一旦檢出大腸桿菌,即意味著直接或間接地被糞便污染,而在衛(wèi)生學(xué)上被用于飲水,牛奶或食品等的糞源性污染衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo);并且由于大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道病原菌相近,它的出現(xiàn)也可能預(yù)示著某些腸道病原菌(例:沙門氏菌、志賀氏菌)的存在,因此該細(xì)菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌.近來,有些國家在執(zhí)行HACCP管理中,將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監(jiān)測指標(biāo)和HACCP實(shí)施效果的評估指標(biāo).

致瀉性大腸桿菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病,其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大.附表3是我國部分省市主要腹瀉病原體檢出率情況,盡管目前報道各地主要腹瀉病是由志賀氏菌或輪狀病毒引起的,但是,多年來,致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉病例始終位于第二位,可見大腸桿菌腸道傳染的廣泛性.還有,致瀉性大腸桿菌亦可常年引發(fā)人體腹瀉,以夏秋季為高峰,在患者感染住院率中,嬰幼兒占60%以上.近來,EHEC O157:H7為世界衛(wèi)生組織(WHO)定為新的食源性致病菌,其引發(fā)的出血性腸炎的暴發(fā)或散發(fā)病例,自1983年以來在北美州(美國、加拿大)地區(qū)逐年增多,英國、日本亦有爆發(fā)和散發(fā)病例報道,我國也發(fā)現(xiàn)散發(fā)病例,尚未有爆發(fā)EHEC的報道.附表4為近幾年EHEC的污染狀況.

五、大腸桿菌檢驗程序圖解:

LST肉湯

37攝氏度,48h

LST肉湯管陽性 (疑似大腸菌群)37攝氏度,48h

EC肉湯44攝氏度,24h　　EC肉湯產(chǎn)氣管為陽性(糞大腸菌群)

陽性管再培養(yǎng)24h

EMB平板分離

37攝氏度,24h黑色菌落移種營養(yǎng)瓊脂斜面

LST肉湯　IMViC生化試驗革蘭氏染色

產(chǎn)酸產(chǎn)氣　++--/-+-- 　無芽胞G-桿菌

大腸桿菌

說明: