微生物實(shí)驗(yàn)室:放線菌形態(tài)的觀察
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
一次性的預(yù)灌裝培養(yǎng)基
放線菌形態(tài)的觀察
目的要求:掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法,并觀察放線菌的形態(tài)特征.
基本原理
和細(xì)菌的單染色一樣,放線菌也可用石炭酸復(fù)紅或呂氏堿性美藍(lán)等染料著色后,在顯微鏡下觀察其形態(tài).玻璃紙具有半透膜特性,其透光性與載玻片基本相同,使放線菌生長(zhǎng)在玻璃紙瓊脂平皿上,然后將長(zhǎng)菌的玻璃紙剪取一小片,貼放在載玻片上,用顯微鏡即可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)的個(gè)體形態(tài).
放線菌是由不同長(zhǎng)短的纖細(xì)的菌絲所形成的單細(xì)胞菌絲體.菌絲體分為兩部分,即潛入培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)菌絲(或稱基內(nèi)菌絲)和生長(zhǎng)在培養(yǎng)基表面的氣生菌絲.有些氣生菌絲分化成各種孢子絲,呈螺旋形 波浪形或分枝狀等.孢子常呈圓形 橢圓形或桿形.氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據(jù).
器材
細(xì)黃鏈霉菌(5406放線菌,Streptomyces microflavus)或灰色鏈霉菌(S.griseus)；弗氏鏈霉菌(S.fradiae)；
石炭酸復(fù)紅染液,呂氏堿性美藍(lán)染液,加拿大樹膠,玻璃紙,高氏1號(hào)培養(yǎng)基；
顯微鏡,載玻片,蓋玻片,玻璃棒,接種鏟,小刀,鑷子等.
操作步驟
放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察
(1)將滅菌后的高氏1號(hào)培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿,每皿倒15ml左右,凝固后備用.
(2)用經(jīng)火焰滅過菌的小鑷子將滅菌優(yōu)質(zhì)玻璃紙平鋪在平皿培養(yǎng)基上,如果瓊脂培養(yǎng)基和玻璃紙之間有氣泡,可以用滅過菌的玻璃棒將氣泡除去.
(3)將3至5ml無菌水倒入弗氏鏈霉菌的斜面培養(yǎng)物里,制成菌懸液,再適當(dāng)稀釋.
(4)用無菌吸管取0.1ml的孢子懸液稀釋液,接種在玻璃紙上,并用無菌玻璃棒涂勻后,置 28攝氏度培養(yǎng),直至菌長(zhǎng)好,備用.
(5)在潔凈的載玻片上滴一小滴水,稍涂布.取出培養(yǎng)皿,打開皿蓋,用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開,再用剪刀剪取小片長(zhǎng)有菌的玻璃紙,菌面朝上放在載玻片的水面上,使紙平貼載玻片.
(6)將載玻片置顯微鏡下觀察.
附:玻璃紙滅菌方法在玻璃紙滅菌時(shí),若直接將干燥的玻璃紙滅菌,它就會(huì)縮小,不便使用.故需作如下處理:將玻璃紙和濾紙剪成培養(yǎng)皿大小的圓形紙片,用水浸泡后把濕濾紙和玻璃紙交互重疊地放在培養(yǎng)皿中,借濾紙將玻璃紙隔開.然后進(jìn)行濕熱滅菌,備用.
營(yíng)養(yǎng)菌絲的觀察
1用接種鏟連同培養(yǎng)基挑取細(xì)黃鏈霉菌菌苔置載玻片中央.
2用另一載玻片將其壓碎,棄去培養(yǎng)基,制成涂片,干燥 固定.
3用呂氏堿性美藍(lán)染液或石炭酸復(fù)紅染液染0.5至1分鐘,水洗.
4干燥后,用油鏡觀察營(yíng)養(yǎng)菌絲的形態(tài).
氣生菌絲與營(yíng)養(yǎng)菌絲的比較觀察
1將高氏1號(hào)培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿,制成4mm左右的培養(yǎng)基平板,經(jīng)培養(yǎng)檢驗(yàn)后無菌,備用.
2用火焰滅菌的鑷子將無菌蓋玻片以45度傾斜角插入平皿培養(yǎng)基瓊脂內(nèi),然后將細(xì)黃鏈霉菌的孢子懸液(濃度以稀釋10-2至10-3為好),接種在蓋玻片與平皿培養(yǎng)基的界面上.
3倒置于28攝氏度培養(yǎng)4至5天后,小心地將蓋玻片取出,把有菌的一面朝上,放在載玻片上,置顯微鏡下進(jìn)行觀察.一般情況是氣生菌絲顏色較深,并比營(yíng)養(yǎng)菌絲粗二倍左右.
孢子絲及孢子的觀察
1將培養(yǎng)3至4天的細(xì)黃鏈霉菌的培養(yǎng)皿打開,放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣,直接觀察氣生菌絲和孢子絲的形態(tài),注意其分枝情況 卷曲情況等.
2取清潔的蓋玻片一塊,在菌落上面輕輕按壓一下,然后將印有痕跡的一面朝下放在有一滴呂氏堿性美藍(lán)染液的載玻片上,將孢子等印浸在染液中,制成印片.用油鏡觀察孢子的形狀 孢子絲等.
3取干凈載玻片一塊,在玻片中央加一小滴加拿大樹膠,使樹膠攤成一薄層,放置數(shù)分鐘,使略微晾干(但不要過分干燥).然后用小刀切取細(xì)黃鏈霉菌培養(yǎng)體一塊(帶培養(yǎng)基切下).將培養(yǎng)體表面貼在涂有樹膠的玻片上,用另一玻片輕輕按壓(不要壓碎),然后將放線菌培養(yǎng)體小心棄去,注意不要使培養(yǎng)體在玻片上滑動(dòng),否則印痕模糊不清.將制好的印片通過火焰固定,用石炭酸復(fù)紅染色1分鐘,水洗,晾干(不能用吸水紙吸干).用油鏡觀察孢子絲的形態(tài)及孢子排列情況.
青島日水生物
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