微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

作者：

預(yù)填裝培養(yǎng)基平板

微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)

培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。

培養(yǎng)基制備過程中的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的水化：培養(yǎng)基水化時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長；配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水 ,不能含

有任何可能抑制或影響微生物生長的物質(zhì)。

培養(yǎng)基的溶解：在培養(yǎng)基分裝滅菌前,各成分應(yīng)溶解均勻, 使用電爐等設(shè)備煮沸培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)用小火加熱,并邊加熱邊攪拌,避免培養(yǎng)基焦化或爆沸溢出。

培養(yǎng)基的滅菌：已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌；濕熱滅菌必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間。

培養(yǎng)基的pH：微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。

調(diào)整培養(yǎng)基的pH,應(yīng)用1 mol/LNaOH或1 mol/L

HCl調(diào)整pH，一般滅菌前比最終pH高0.2～0.3。

培養(yǎng)基的保溫：滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,避免長時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。

培養(yǎng)基的接種：平板在接種使用時(shí),表面必須無明顯潮濕水珠；對于保存的培養(yǎng)基,需待溫度回復(fù)至室溫后才可使用,并且使用前應(yīng)檢查；

干燥培養(yǎng)基應(yīng)遵循先入先出的原則；貯存于陰涼干燥處,避免強(qiáng)光直射；金黃色葡萄球菌在甘露醇氯化鈉瓊脂上典型特征圖片

已配制的培養(yǎng)基建議平板傾注后立即使用；在平板上標(biāo)上制備日期和/或有效期和名稱；固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次；

三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）

未校正pH時(shí)，不同廠家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)硫化氫強(qiáng)度不一；

校正pH7.5后，各培養(yǎng)基硫化氫反應(yīng)均有改善,不同廠家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)硫化氫強(qiáng)度仍不相同；

三糖鐵培養(yǎng)基（TSI）

由于培養(yǎng)基pH太低, 本身就是黃色,細(xì)菌生長后下層仍為黃色, 而斜面變?yōu)槌燃t色,易誤判斷為下層“ 變?yōu)辄S色” 。由此定為發(fā)酵菌，造成誤判；

培養(yǎng)基適用性檢查：計(jì)數(shù)培養(yǎng)基；控制菌檢查用培養(yǎng)基。

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查

對照培養(yǎng)基：系指按培養(yǎng)基處方特別制備、質(zhì)量優(yōu)良的培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)基適用性檢查。由中國藥品生物制品檢定所研制及分發(fā)。

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：大腸埃希菌

金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌，白色念珠菌

玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基：黑曲霉，白色念珠菌

酵母浸出粉胨葡萄糖，瓊脂培養(yǎng)基：白色念珠菌

結(jié)果判定：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)/對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)≥ 70%；菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。

控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查

增菌培養(yǎng)基促生長能力檢查：分別接種不大于100cfu 的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。

固體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取試驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)50～100cfu）分別

涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基生長的菌落大小形態(tài)特征應(yīng)一致。

培養(yǎng)基抑制能力檢查：接種不少于100cfu 的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最長時(shí)間下培養(yǎng)，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長。

固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取試驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)不大于100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及時(shí)間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌生長的菌落形態(tài)、大小、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。

液體培養(yǎng)基指示能力檢查：分別接種不大于100cfu 的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌生長情況、指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。

培養(yǎng)基質(zhì)量控制（2010版藥典）

實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項(xiàng)目

pH，適用性檢查試驗(yàn)，定期的穩(wěn)定性，檢查以確定有效期。

培養(yǎng)基質(zhì)量控制（ CHP與USP的異同點(diǎn)）

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查：

CHP，大腸埃希菌，比值大于70%，培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，酵母浸出粉胨葡萄糖，瓊脂培養(yǎng)基(YPD)

USP，銅綠假單胞菌，結(jié)果判定1/2 — 2，培養(yǎng)基：大豆消化酪素培養(yǎng)基，沙氏葡萄糖培養(yǎng)基

培養(yǎng)基質(zhì)量控制（ CHP與USP的異同點(diǎn)）

控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查：

CHP與USP方法基本一致，檢查用培養(yǎng)基不同。

同行的方法介紹

培養(yǎng)基質(zhì)量控制