生活飲用水的微生物檢測
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
山東培養(yǎng)基生產(chǎn)公司
生活飲用水的微生物檢測
一、菌落總數(shù)的檢測
1、生活飲用水(自來水)
無菌取樣1毫升,營養(yǎng)瓊脂NA傾注平板計數(shù)(菌落總數(shù)).
傾注平板:把菌懸液直接加到平板上,然后倒上溫度適宜的培養(yǎng)基,混勻,凝固后培養(yǎng),再計數(shù).
2、水源水
無菌取樣,無菌生理鹽水稀釋,不同濃度1毫升營養(yǎng)瓊脂傾注計數(shù)
二、總大腸菌群的檢測
總大腸菌群——一群在37攝氏度培養(yǎng)24小時能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌.
(一)多管發(fā)酵法
乳糖發(fā)酵試驗
雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液CFU其實就是TSB,計數(shù)添加TTC
單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
無菌生理鹽水
10毫升/1毫升(稀釋后)水樣接種到上述培養(yǎng)基內(nèi),36攝氏度±1培養(yǎng)24小時,若不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,可報告總大腸菌群陰性；若產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,進行下一步
1、分離培養(yǎng)
將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管轉(zhuǎn)種在伊紅美蘭瓊脂平板上36攝氏度±1培養(yǎng)18～24小時,觀察菌落形態(tài),挑取符合下列特征的菌落做革蘭氏染色、鏡檢和證實實驗.
深紫黑色、具有金屬光澤的菌落；紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色、中心較深的菌落.
2、證實實驗
染色為陰性無芽孢桿菌,接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
(二)濾膜法
總大腸菌群濾膜法——指用孔徑為0.45μm的微孔濾膜過濾水樣,將濾膜貼在添加乳糖的選擇性培養(yǎng)基上36±1攝氏度培養(yǎng)24小時,能形成特征性菌落的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌以檢測水中總大腸菌群的方法.
1、準備濾膜
濾膜、濾器滅菌
2、過濾水樣
3、培養(yǎng)
用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分,移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上,濾膜截留細菌面向上,濾膜應與培養(yǎng)基完全貼緊,兩者間不得留有氣泡,將平皿倒置放入37攝氏度恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時
4、結(jié)果觀察
挑取符合下列特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢:
紫紅色、具有金屬光澤的菌落；深紅色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色、中心色較深的菌落
鏡檢為陰性無芽孢桿菌再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
總大腸菌群菌落數(shù)的計算
(三)酶底物法
總大腸菌群酶底物法——指在選擇性培養(yǎng)基上能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶的細菌群組,該細菌群組能分解色原底物釋放出色原體使培養(yǎng)基呈現(xiàn)顏色變化,以此技術(shù)來檢測水中總大腸菌群的方法.
培養(yǎng)基:ONPG-MUG(MMO-MUG)
1、定性反應
用100毫升的無菌稀釋瓶量取100毫升水樣,加入2.7g±0.5gMMO-MUG培養(yǎng)基粉末,混搖均勻使之完全溶解后,放入36±1攝氏度培養(yǎng)24小時.
2、定量反應
10管法；51孔定量盤法.
3、結(jié)果判讀
將水樣培養(yǎng)24小時后進行結(jié)果判讀,如果結(jié)果為可疑陽性,可延長培養(yǎng)時間到28h進行結(jié)果判讀,超過28h之后出現(xiàn)的顏色反應不作為陽性結(jié)果.
水樣經(jīng)24小時培養(yǎng)之后如果顏色變成黃色,判斷為陽性反應,表示水中含有總大腸菌群；水樣顏色未發(fā)生變化,判斷為陰性反應,定性反應結(jié)果以總大腸菌群檢出或未檢出報告.
三、耐熱大腸菌群(靠溫度篩選,培養(yǎng)基只是展示方式.)
耐熱大腸菌群——用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開,在44.5攝氏度仍能生長的大腸菌群,稱為耐熱大腸菌群.致病性危害性更高.
(一)多管發(fā)酵法
自總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗中的陽性管中取1滴轉(zhuǎn)種于EC肉湯培養(yǎng)基(純營養(yǎng)無指示劑)中,置44.5攝氏度培養(yǎng)24小時,若不產(chǎn)氣可報告陰性,若產(chǎn)氣,轉(zhuǎn)種于伊紅美蘭瓊脂平板上,置44.5攝氏度培養(yǎng)18～24小時,凡平板上有典型菌落者,則證實為耐熱大腸菌群陽性.
(二)濾膜法
培養(yǎng)基:MFC培養(yǎng)基
培養(yǎng)方式:44.5攝氏度培養(yǎng)24小時(恒溫水浴)
結(jié)果:耐熱大腸菌群在此培養(yǎng)基上菌落為藍色,非耐熱大腸菌群菌落為灰色至奶油色.可疑菌轉(zhuǎn)種EC培養(yǎng)基上44.5攝氏度培養(yǎng)24小時
四、大腸埃希氏菌
(一)大腸埃希氏菌多管發(fā)酵法——指多管發(fā)酵法總大腸菌群陽性,在含有熒光底物的培養(yǎng)基上44.5攝氏度培養(yǎng)24小時產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶,分解熒光底物釋放出熒光產(chǎn)物,是培養(yǎng)基產(chǎn)生特征性熒光的細菌,以此來檢測水中大腸埃希氏菌的方法.
培養(yǎng)基:EC-MUG培養(yǎng)基
培養(yǎng)方式:44.5攝氏度培養(yǎng)24小時(恒溫水浴)
結(jié)果:紫外燈下產(chǎn)熒光
(二)濾膜法_大腸桿菌只能和MUG反應_
培養(yǎng)基:MUG營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA-MUG)
培養(yǎng)方式:36±1攝氏度培養(yǎng)4h
結(jié)果:紫外燈照射菌落邊緣或背面有藍色熒光表示水中含有大腸埃希氏菌
(三)酶底物法
同總大腸菌群