已經(jīng)配制好的培養(yǎng)基怎么滅菌？

發(fā)布時(shí)間：

2022-11-16

作者：

國產(chǎn)大的培養(yǎng)基企業(yè)

已經(jīng)配制好的培養(yǎng)基怎么滅菌？如何判定配制的培養(yǎng)基滅菌是否徹底？

培養(yǎng)基干粉是有菌的，配置好后，如果不及時(shí)滅菌，細(xì)菌就會大量繁殖，消耗營養(yǎng)成分，導(dǎo)致培養(yǎng)基失去原有作用，所以必須及時(shí)滅菌。

如果怕高壓不充分，滅菌不徹底，可一每次多配置一小份同樣的培養(yǎng)基，高壓后放置培養(yǎng)箱中，如果該小份培養(yǎng)基出現(xiàn)大量菌增殖現(xiàn)象，說明滅菌不充分；反之，則是無菌的。

滅菌指示劑分為化學(xué)指示劑和生物指示劑。滅菌時(shí)將指示劑放入滅菌鍋中的不同部位一同滅菌，如果是化學(xué)指示劑則其顏色變化符合要求；生物指示劑（嗜熱芽胞桿菌）滅菌后進(jìn)行培養(yǎng)為陰性。

按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌：普通培養(yǎng)基為121攝氏度20分鐘，以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份。經(jīng)滅菌后，如需要作斜面固體培養(yǎng)基，則滅菌后立即擺放成斜面，斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜；半固體培養(yǎng)基滅菌后，垂直冷凝成半固體深層瓊脂。

倒平板：將需倒平板的培養(yǎng)基，于水浴鍋中冷卻到45至50攝氏度，立刻倒平板。

滅菌是指殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生物，滅菌的方法分物理和化學(xué)滅菌法兩大類。本實(shí)驗(yàn)主要介紹物理方法的一種，即加熱滅菌。

加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種。通過加熱使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性，從而達(dá)到殺菌目的。蛋白質(zhì)的凝固變性與其自身含水量有關(guān)，含水量越高，其凝固所需要的溫度越低。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，因?yàn)樵跐駸崆闆r下，菌體吸收水分，使蛋白質(zhì)易于凝固；同時(shí)濕熱的穿透力強(qiáng)，可增加滅菌效力。

高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點(diǎn)隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計(jì)的。當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到1.05kg/cm2小時(shí)，水蒸氣的溫度升高到121攝氏度，經(jīng)15至30分鐘，可全部殺死鍋內(nèi)物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標(biāo)本和工作服等都可應(yīng)用此法滅菌。

培養(yǎng)基滅菌注意事項(xiàng)：

加水：打開滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加水到水位線。立式消毒鍋用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。

裝料、加蓋：滅菌材料放好后，關(guān)閉滅菌器蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。

排氣:打開排氣口,用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí)，維持5分鐘，使鍋內(nèi)冷空氣完全排凈。

升壓、保壓和降壓：當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí)，控制電壓以維持恒溫，并開始計(jì)算滅菌時(shí)間，待時(shí)間達(dá)到要求（一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121攝氏度，20分鐘）后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時(shí)，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由于瓶內(nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶內(nèi)液體沖出容器之外。

滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng)：滅菌后放于37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)無菌生長，可保存?zhèn)溆?；斜面培養(yǎng)基取出后，立即擺成斜面后空白培養(yǎng)；半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后，空白培養(yǎng)。

干熱滅菌法：通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160至170攝氏度維持1至2銷售。

干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌。

滅菌前的準(zhǔn)備：玻璃器皿等在滅菌前必須經(jīng)正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi)；三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結(jié)扎緊，以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染；吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過火焰燒去，滅菌時(shí)將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進(jìn)行滅菌，也可用紙條斜著從吸管尖端包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁并擰幾下，再將包好的吸管集中滅菌。

干燥箱滅菌：將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi)，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通；不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160至170攝氏度并恒溫1至2小時(shí)，注意勿使溫度過高，超過170攝氏度，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為120攝氏度持續(xù)30分鐘即可。溫度降至60至70攝氏度時(shí)方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。用此法滅菌時(shí)，絕不能用油、蠟紙包扎物品。

火焰滅菌：直接用火焰灼燒滅菌，迅速徹底。對于接種環(huán)，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進(jìn)行滅菌。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也采用通過火焰而達(dá)到滅菌的目的。