化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定
發(fā)布時(shí)間：
2022-11-16
作者：
一次性成品培養(yǎng)基日水生物
化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定
Standard methods of microbiological examination for cosmetics Standard plate count
細(xì)菌總數(shù)系指1克或1毫升化妝品中所含的活菌數(shù)量.測定細(xì)菌總數(shù)可用來判明化妝品被細(xì)菌污染的程度,以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者的衛(wèi)生狀況,是對化妝品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價(jià)的綜合依據(jù)
本標(biāo)準(zhǔn)采用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法
方法提要
化妝品中污染的細(xì)菌種類不同,每種細(xì)菌都有它-定的生理特性,培養(yǎng)時(shí)對營養(yǎng)要求,培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、帶氧性質(zhì)等均有所不同.在實(shí)際工作中,不可能做到滿足所有菌的要求,因此所測定的結(jié)果,只包括在本方法所使用的條件下(在卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂上,于37C培養(yǎng)48h)生長的一群嗜中溫的需氧及兼性厭氧的細(xì)菌總數(shù)
生理鹽水:見克B7918.1-87《化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法總則》
卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
成分:蛋白胨20克,牛肉膏3克,氯化鈉5克,瓊脂15克,卵磷脂1克,吐溫807克,蒸餾水1000毫升
制法:先將卵磷脂加到少量蒸餾水中,加熱溶解,加入吐溫80將其他成分(除瓊脂外)加到其余的蒸餾水中,溶解.加入已溶解的卵磷脂、吐溫80,混勻,調(diào)pH值為7.1~7.4,加入瓊脂,121C(151b)20分鐘高壓滅菌,儲(chǔ)存于冷暗處備用
儀器
錐形燒瓶,量簡
pH計(jì)或精密pH試紙,高壓消毒鍋,試管,滅菌平皿:直徑9cm,滅菌刻度吸管:10毫升、2毫升、1毫升,酒精燈,恒溫培養(yǎng)箱,放大鏡
操作步驟
用滅菌吸管吸取1:10稀釋的檢樣2毫升,分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi),每皿1毫升.另取1毫升注入.到9毫升滅菌生理鹽水試管中(注意勿使吸管接觸液面),更換一支吸管,并充分混勻,使成1:100稀釋液.吸取2毫升,分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi),每皿1毫升.如樣品含菌量高,還可再稀釋成1;1000,1;10000,.....等,每種稀釋度應(yīng)換1支吸管
將熔化并冷至45~50C的卵磷脂、吐溫80、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿內(nèi),每皿約15毫升,另傾注一個(gè)不加樣品的滅菌空平皿,作空白對照.隨即轉(zhuǎn)動(dòng)平皿,使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻,待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,置37攝氏度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h
菌落計(jì)數(shù)方法
先用肉眼觀察,點(diǎn)數(shù)菌落數(shù),然后再用放大5~10倍的放大鏡檢查,以防遺漏.記下各平皿的菌落數(shù)后.求出同-稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù).若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長時(shí),該平皿不宜計(jì)數(shù).若片狀菌落不到平皿中的--半,而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻,則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘2,以代表全皿菌落數(shù)
菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法
首先選取平均菌落數(shù)在30~300之間的平皿,作為菌落總數(shù)測定的范圍.當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí),即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)
若有兩個(gè)稀釋度,其平均菌落數(shù)均在30~300個(gè)之間,則應(yīng)求出兩者菌落總數(shù)之比值來決定.若其比值小于或等于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù),若大于2則報(bào)告其中較小的菌落數(shù)
若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300個(gè),則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之
若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均少于30個(gè),則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之
若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30~300個(gè)之間,其中一個(gè)稀釋度大于300個(gè),而相鄰的另一稀釋度小于30個(gè)時(shí),則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之
若所有的稀釋度均無菌生長,報(bào)告數(shù)為每克或每毫升小于10個(gè)
菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告,菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí),按實(shí)有數(shù)值報(bào)告之,大于100時(shí),采用二位有效數(shù)字,在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值,應(yīng)以四舍五入法計(jì)算.為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù),可用10的指數(shù)來表示.在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí),應(yīng)注明樣品的稀釋度
附加說明:
本標(biāo)準(zhǔn)由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所歸口
本標(biāo)準(zhǔn)由“化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法”起草小組起草
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人周淑玉
本標(biāo)準(zhǔn)由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所負(fù)責(zé)解釋