中國(guó)藥典關(guān)于微生物技術(shù)的問答
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-24
作者：
山東培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家
1 微生物方法驗(yàn)證，要求菌株回收率≧70%，是否有上限要求？（如不得高于100%或者110%）。
答：沒有上限。但一般不會(huì)高于100%，因?yàn)榧舆M(jìn)去的菌量是一樣的，如果超過100%可看成是操作上的誤差。按微生物的特性，如果不超過太多，是可以接受的，但沒有具體上限。（本所控制在110%以內(nèi)）。
2 在微生物方法驗(yàn)證時(shí)，霉菌 酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證只用黑曲霉及白色念珠菌做方法學(xué)驗(yàn)證，在操作培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)：在玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)生長(zhǎng)的白色念珠菌的形態(tài)太小與營(yíng)養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)的細(xì)菌的某些形態(tài)大小相同，這樣如何判斷營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)的菌落是否是白色念珠菌？為何這兩種菌落形態(tài)相似？
答：菌落形態(tài)相似不等于就是同一種菌。在驗(yàn)證時(shí)，營(yíng)養(yǎng)瓊脂的驗(yàn)證菌株為大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌，如果本底菌為0，則營(yíng)養(yǎng)瓊脂上長(zhǎng)的菌應(yīng)該不是白色念珠菌。要判斷是否為白色念珠菌，應(yīng)進(jìn)行白色念珠菌的相應(yīng)鑒定方法后才能確定。任何微生物都不可能只是從菌落就可以進(jìn)行判斷，只能判斷為疑似，然后再做一系列相應(yīng)的鑒定實(shí)驗(yàn)后才能進(jìn)行判斷。
3 生孢梭菌的適宜計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基？（很多驗(yàn)證需對(duì)生孢梭菌進(jìn)行計(jì)數(shù)）
答：最簡(jiǎn)便的方法是用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基上層為含氧層，適宜需氧菌生長(zhǎng)，下層為厭氧層（下層高度最好7cm以上），適宜厭氧菌生長(zhǎng)。在培養(yǎng)16~18小時(shí)這個(gè)時(shí)間進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)，超過20小時(shí),由于繁殖量大，培養(yǎng)基將混濁，點(diǎn)計(jì)不清。或者是用哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基，澆注后，置厭氧罐（袋）里，再置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。
4 微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)，請(qǐng)問這些培養(yǎng)基還需要做無菌檢查試驗(yàn)嗎？
答：微生物限度檢查，藥典上沒有特別說明對(duì)培養(yǎng)基作無菌性檢查，但每次都要做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，陰性對(duì)照是檢查整個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)是否被微生物污染，實(shí)際上也包括了培養(yǎng)基的無菌性檢查。
5 微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基如：營(yíng)養(yǎng)瓊脂 EMB Macl等培養(yǎng)基其分裝容器需要預(yù)先滅菌嗎？
答：不用。只要是潔凈的就行，因?yàn)榉盅b后還要滅菌。
6 具有抑菌性的供試品，細(xì)菌 霉菌 都是用薄膜過濾法來檢查的，那么沙門菌可以用常規(guī)法來檢查嗎？就是可以不經(jīng)過過濾直接接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯中嗎？
答：這要看你驗(yàn)證的結(jié)果。如果通過驗(yàn)證，你的品種是對(duì)沙門菌有抑制作用，且用培養(yǎng)基稀釋法不能消除其抑菌性，則就必需考慮用薄膜過濾法。
7 微生物限度檢查中，稀釋劑對(duì)照組，是在稀釋液中加入50~100cfu的菌，還是把稀釋液制成含量50~100cfu的濃度呢？
答：是把稀釋液制成含50~100cfu/ml菌的濃度。（在這里，我對(duì)上次講課時(shí)關(guān)于稀釋劑對(duì)照組操作的PPT進(jìn)行糾正，對(duì)于離心+薄膜過濾法的稀釋劑對(duì)照組的操作應(yīng)該是：含50~100cfu/ml菌的稀釋液 離心 取稀釋液（與試驗(yàn)組同樣取上層液） 過濾 沖洗 貼平板）
8 稀釋級(jí)對(duì)照組:含50~100cfu/ml菌稀釋液→離心→取供試液+稀釋液 過濾 沖洗→貼平板。這里需要加供試液?jiǎn)?？是否?yīng)為上述離心后的菌液？答：不需要取供試液，只取“上述離心后的菌液”。關(guān)于這一情況，我在第7題里已經(jīng)作了說明。
9 當(dāng)要做稀釋劑對(duì)照組時(shí)，是否就是從制備供試品時(shí)就同時(shí)做一份不含供試品而是含菌50~100cfu的樣品？等于按同一個(gè)方法制備一個(gè)供試品，五個(gè)含菌稀釋液對(duì)照組？
答：是的。
10 菌落計(jì)數(shù)是否需要將每天計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)登記在記錄本上，是否可以只記錄最終的數(shù)據(jù)？
答：可以。每天計(jì)數(shù)的目的是預(yù)防菌落彌漫互相覆蓋，干擾最終的點(diǎn)計(jì)。你可以用油性筆將每天點(diǎn)計(jì)的數(shù)記錄在培養(yǎng)皿上，發(fā)報(bào)告時(shí)只要最終菌落數(shù)就行了。
11 若樣品中有不溶物（如片劑中的輔料顆粒），經(jīng)常會(huì)影響培養(yǎng)前期的結(jié)果，藥典要求逐日計(jì)數(shù)，所以報(bào)告中會(huì)出現(xiàn)第二 三日菌落數(shù)小于第一日的現(xiàn)象，請(qǐng)問該如何向客戶或監(jiān)檢機(jī)構(gòu)解釋這種結(jié)果？或者是否可以不計(jì)第一 二日菌落數(shù)，待輔料顆粒與菌落可以區(qū)分后再計(jì)數(shù)？
答：報(bào)告書不需要顯示第一 第二天的結(jié)果，只需報(bào)告最終結(jié)果。理由請(qǐng)見第9題答復(fù)?；蛘呤窃跔I(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入TTC試劑（每100ml加入0.1%）
12 由于微生物檢驗(yàn)的特殊性，對(duì)于樣品的微生物限度檢查計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)是否可登記在表格內(nèi)（此表格僅含樣品名稱 批號(hào)及檢查結(jié)果）。之后再將檢測(cè)結(jié)果移至詳細(xì)記錄中？
答：原始記錄應(yīng)該只有1份。如果你說的詳細(xì)記錄是屬于一般記錄，是沒有必要的，如果是指報(bào)告書，就應(yīng)該沒問題。這要看你自己訂的SOP。
13 直接接種法培養(yǎng)后的菌落報(bào)告：原液230cfu,稀釋10倍后 40cfu,請(qǐng)問按2010版藥典的菌落數(shù)報(bào)告規(guī)則如何報(bào)告菌落數(shù)？
答：報(bào)告菌落數(shù)為40×10=400cfu。應(yīng)以菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)后的最大值作為報(bào)告結(jié)果。
14 05版藥典供試品離心5分鐘，而10版藥典改用離心3分鐘，原來按5分鐘驗(yàn)證的產(chǎn)品是否需要重新驗(yàn)證？
答：是的。需要再確認(rèn)一下。
15 10版藥典附錄微生物限度檢查法中結(jié)果判斷的菌落計(jì)數(shù)單位是以“cfu”表示，但正文品種項(xiàng)下是以“個(gè)”表示，最終應(yīng)以哪位為準(zhǔn)呢？
答：應(yīng)該是以cfu為單位。正文是由于印刷時(shí)沒統(tǒng)一修改過來，關(guān)于這個(gè)問題，在增補(bǔ)本上修訂過來。（在增補(bǔ)本沒出來之前，正文品種還是以個(gè)為單位）
16 為何控制菌液的濃度為50-100cfu/ml。
答：50-100cfu在平板上比較好點(diǎn)計(jì)，菌落不容易重疊。少于50，則實(shí)驗(yàn)誤差會(huì)增大，重現(xiàn)性不好，大于100則容易造成菌落太密或重疊不好計(jì)數(shù)。
17 藥典上控制菌檢查的方法驗(yàn)證，只是說把菌加至增菌培養(yǎng)基中檢出即可，那我們實(shí)際做驗(yàn)證與記錄時(shí)，是否要做增菌以后的步驟呢？
答：要。不然你怎么知道檢出來的菌是你加進(jìn)去的試驗(yàn)菌呢？
18 采用薄膜過濾法檢驗(yàn)，陽性菌，計(jì)數(shù)是否也用此方法計(jì)數(shù)？
答：是的。
19 對(duì)于10版藥典延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，控制菌35-37℃改為30-35℃培養(yǎng)溫度，一些已經(jīng)驗(yàn)證（按05版藥典）檢品是否需要重新驗(yàn)證？是否有必要進(jìn)行延長(zhǎng)時(shí)間前后菌生長(zhǎng)情況變化的驗(yàn)證試驗(yàn)？
答：目前沒有相關(guān)性規(guī)定，我們認(rèn)為可按原來已經(jīng)驗(yàn)證的方法，用2010年版的培養(yǎng)時(shí)間和溫度再確認(rèn)一下，如果結(jié)果符合藥典要求，則可用。如果不可行，則調(diào)整后再進(jìn)行驗(yàn)證。
20 若無需都重新驗(yàn)證，那么參照標(biāo)準(zhǔn)為05版藥典，又可以通過什么文件來更改為參照10版藥典？
答：請(qǐng)看上一題。
微生物培養(yǎng)基qdrishui