細(xì)菌單菌落的概念是什么？如何得到單菌落？
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-24
作者：
培養(yǎng)基制備廠家
細(xì)菌單菌落的概念
單菌落是單個(gè)細(xì)菌形成的菌落，用于計(jì)算細(xì)菌數(shù)量的一種方法。單菌落上的細(xì)菌性質(zhì)是一樣的，DNA，所處細(xì)胞期都一樣，便于科學(xué)研究，一個(gè)單菌落就是一個(gè)圓點(diǎn)。
單菌落是指來(lái)源于單一孢子或營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞或一群相同的細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部形成的肉眼可見的集合體。
在做轉(zhuǎn)化試驗(yàn)或者是涂平板時(shí)，必需從長(zhǎng)出的菌中挑取單菌落。只有挑單克隆搖菌才能保證你的菌液是純的，提出來(lái)的質(zhì)粒才純，否則進(jìn)行pcr與酶切鑒定時(shí)會(huì)因菌液不純而出現(xiàn)雜帶。
單菌落是由一個(gè)菌體分裂產(chǎn)生的，菌落內(nèi)的所有菌體幾乎一樣，都包含有轉(zhuǎn)化進(jìn)去的目標(biāo)質(zhì)粒，所以才能在平板篩選壓力下生長(zhǎng)。假如在操作過(guò)程中混雜入污染的雜菌或者轉(zhuǎn)化入其他質(zhì)粒（比如使用的器材污染等）也可能會(huì)在平板上意外生長(zhǎng)，若將其和期望的重組子一起挑出來(lái)的話，最后將得不到質(zhì)粒或者得到的質(zhì)粒是不純的，所以這也是抽出來(lái)的質(zhì)粒還要鑒定的原因。
篩選出來(lái)的菌落不可能是百分百純的，所以分別挑單克隆然后再鑒定。而且在搖菌的過(guò)程中需要保種，鑒定無(wú)誤的話，保種的就可以用于以后的擴(kuò)增。一般我們用酶切進(jìn)行驗(yàn)證質(zhì)粒。如果不是單菌落的話，酶切圖譜上可以很容易就看出來(lái)的。這個(gè)時(shí)候你需要把原來(lái)保存的挑菌發(fā)酵的菌種重新劃單菌落去進(jìn)行純化。
劃線法培養(yǎng)首先挑取菌種試管里的菌，在培養(yǎng)基上的一邊畫幾條短的平行線，然后將接種環(huán)滅菌。（注意只畫培養(yǎng)基的一小部分區(qū)域）然后用滅過(guò)菌的環(huán)靠一下冷卻，在你第一次話的一端再往邊上畫幾條細(xì)線，如此重復(fù)以上操作多畫幾次，直到全部畫滿。這樣的話越到后來(lái)就越稀少，因?yàn)槟忝看味紡囊欢擞脽o(wú)菌接種環(huán)畫到整個(gè)一直線上 所以是越來(lái)越稀的 最終就可以達(dá)到分離單個(gè)菌的目的。另外可以用稀釋法，把稀釋的倍數(shù)提高一些，再用平板劃線自然就可以得到單菌落。
來(lái)自：青島日水生物