微生物實(shí)驗(yàn)無菌檢查法
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
無菌檢查法
1.配制后的培養(yǎng)基的儲(chǔ)存
制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在 2～25℃、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在 3 周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用 若不即時(shí)使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中， 在 2 ～ 25 ℃ 、避光的環(huán)境 下保存，并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。
2.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基圖片
成分:胰酪胨 15.0g
酵母浸出粉 5.0g
葡萄糖/ /無水葡萄糖 5.5g/5.0g
L-胱氨酸 0.5g
硫乙醇酸鈉(或硫乙醇酸) 0.5g（0.3 ml)
氯化鈉 2.5g
新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
瓊脂 0.75g
水 1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 為弱堿性， 煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié) pH，使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.1±0.2。 分裝至適宜的容器中， 其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的 1/2。滅菌。在供試品接種前， 培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/51/ 3， 否則， 須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過 20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。
3.刪除了0.5% 葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查 ）這個(gè)培養(yǎng)基
4.菌液制備
4.1 白色念珠菌菌液的制備培養(yǎng)時(shí)間由24-48小時(shí)，便跟為2-3天；黑曲霉20～25℃培養(yǎng) 5～7 天， 新增或直到獲得豐富的孢子
4.2菌液濃度由每 1ml 含菌數(shù)小于 100cfu（菌落形成單位），變更為適宜濃度的菌懸液
5.培養(yǎng)基接種
5.1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基裝量由12ml變更為適宜體積，TSB由9ml變更為適宜體積
5.2 接種量由小于100cfu變更為不大于100cfu
5.3 取消逐日觀察結(jié)果
6. 無菌培養(yǎng)時(shí)間由14天變更為不少于14天
9205 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則環(huán)境浮游菌、沉降菌及表面微生物監(jiān)測(cè)用培養(yǎng)基一般采用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA） ， 培養(yǎng)溫度為30℃～35℃，時(shí)間為3～5天，必要時(shí)可加入適宜的中和劑。當(dāng)監(jiān)測(cè)結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時(shí)，可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA) ，培養(yǎng)溫度為20℃～ 25℃，時(shí)間為5～7天。如需要，應(yīng)根據(jù)環(huán)境污染微生物種群特性選擇特定的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時(shí)間