常用試劑配制介紹 緩沖液
發(fā)布時間：
2022-12-27
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常用試劑配制介紹 緩沖液
免疫細胞化學中應用的緩沖液種類較多，即使是同種緩沖液，其濃度、pH、離子強度等也常常不同。在此介紹幾種最常用的緩沖液的配制。
1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer, PB）
試劑： NaH2PO4·2H2O
Na2HPO4·12H2O
配制方法：配制時，常先配制0.2mol/L 的NaH2PO4 和0.2mol/L的Na2HPO4， 兩者按一定比例混合即成 0.2mol/L 的磷酸鹽緩沖液（PB），根據(jù)需要可配制不同濃度的PB 和PBS。
（1）0.2mol/L 的Na2HPO4；稱取Na2HPO4.12H2o 31.2g(或NaH2PO4·H2O27.6g)加重蒸水至1000ml 溶解。
（2）0.2mol/L 的 Na2HPO4：稱取NaHPO4.12H2o 71.632g （或Na2HPO4·7H2O 53.6g 或Na2HPO4·2H2o 35.6g）加重蒸水至1000ml 溶解。
（3）0.2mol/L pH7.4 的PB的配制：取19ml 0.2mol/L 的NaH2PO4 和81ml0.2mol/L 的Na2HPO4·12H2O,充分混合即為0.2mol/L的PB（pH 約為7.4～7.5）。若pH 偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調整，室溫保存即可。
2．0.01mol/L 磷酸鹽緩沖生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）
試劑：0.2mol/L PB 50ml
NaCl 8.5～9g(約0.15mol/L)
重蒸水 至 1000ml
配制方法：稱取NaCl 8.5～9g 及0.2mol/L 的PB 50ml，加入1000ml 的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻即可。若擬配制0.02mol/L 的PBS，則PB 量加倍即可，依此類推。
PB 和PBS 是免疫細胞化學實驗中最為常用的緩沖液，0.01mol/L 的PBS 主要用于漂洗組織標本、稀釋血清等，其pH 應在7.25～7.35 之間，否則需要調整。
0.1mol/L 的PB 常用于配制固定液、蔗糖等。一般情況下，0.2mol/l PB 的pH 值稍高些，稀釋成0.01mol/L 的PBS 時，?？蛇_到要求的pH 值，若需調整pH，通常也是調 PB 的pH。
3．Karasson –Schwlt’s 磷酸鹽緩沖液
試劑： NaH2PO4·H2O 3.31g
Na2HPO4·7H2O 33.77g
重蒸水 至 1000ml
配制方法：同前
該緩沖液主要用于配制 Zamboni’s 固定液。
4．0.5mol/L pH7.6 的Tris- HCl 緩沖液
試劑：Tris(三羥甲基氨基甲烷) 60.57g
1N HCl 約420ml
重蒸水 至 1000ml
配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris,加入HCl 后，用1N 的HCl 或1N 的NaOH 將pH 調至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液為儲備液，于4℃冰箱中保存。免疫細胞化學中常用的 Tris-HCl 緩沖液濃度為0.05mol/L， 用時取儲備液稀釋 10 倍即可。
該液主要用于配制Tris 緩沖生理鹽水（TBS）、DAB 顯色液
5．Tris 緩沖生理鹽水（Tris Buffered,Saline,TBS）
試劑：0.5mol/L Tris-HCl 緩沖液 100ml
NaCl 3.5～9g(0.15mol/L)
重蒸水 至 1000ml
配制：先以重蒸水少許溶解NaCl,再加Tris-HCl 緩沖液，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻使Tris 終濃度為0.05mol/L。
TBS 主要用于漂洗標本，常用于免疫酶技術中。
6．Tris-TBS(PBS)
試劑：Triton X-100 10ml(1%)或 3ml(0.3%)
0.5mol/L Tris 緩沖液（pH7.6） 1000ml(50ml)或(0.2mol/L 的 PB)
NaCl 8.5～9g
重蒸水 至 1000ml
配制方法：先以重蒸水少許溶解NaCl 后，加入Triton X-100及Tris 緩沖液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻。
該液常用濃度為1%及0.3%，前者主要用于漂洗標本，后者主要用于稀釋血清。
7．0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸緩沖液
試劑：0.2mol/L 二甲胂酸鈉 500ml
0.1N HCl 28ml
蒸餾水 至 1000ml
配制方法：先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g,加蒸餾水至1000ml，使0.2mol/L 的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl 1.7ml 加蒸餾水至1000ml ,配成0.1N，最后 取 0.2mol/L 二甲胂酸鈉溶液500ml 及0.1n HCl 28ml 混合，加蒸餾水至1000ml，即為0.1mol/L 的二甲胂酸鈉緩沖液。
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