微生物培養(yǎng)基的配置
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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培養(yǎng)基的配置
培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì).培養(yǎng)基中均需含有微生物所必須的能源、碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水和生長(zhǎng)因素,但不同營(yíng)養(yǎng)類型、不同種類的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的要求又有很大差異.培養(yǎng)基還需具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓.
以下為培養(yǎng)基的配置的常規(guī)方法,如配方中有特殊規(guī)定或要求,以配方為依據(jù).
1. 根據(jù)配方,計(jì)算各種營(yíng)養(yǎng)成分用量.一般可用電子天平稱量,遵循由含量低到含量高的稱量原則.針對(duì)含量少的成分,可按比例配成高濃度溶液,再按所需量用移液管吸取.將稱好的成分放入相應(yīng)玻璃容器中.
2. 加入所需量的水(建議使用純化水),加熱使其完全溶解.液體培養(yǎng)基建議使用水浴加熱溶解.
3. 若配制固體培養(yǎng)基,則稱取1.2至2.0％的瓊脂放進(jìn)已稱量好的培養(yǎng)基中,繼續(xù)加熱至瓊脂全部溶解.加熱中隨時(shí)攪拌,防止溢出或糊底.燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)破壞,并產(chǎn)生有毒物質(zhì),不宜再用.
4. 待培養(yǎng)基稍冷卻后,按配方要求調(diào)整pH值.用10％NaOH溶液(或10％HCl溶液)調(diào)整所配培養(yǎng)基的pH.加堿(或酸)溶液時(shí),應(yīng)邊滴加邊攪拌,直至最后調(diào)至要求的pH值.
5. 配好的培養(yǎng)基,根據(jù)需要趁熱分裝至試管或錐形瓶中.裝瓶量一般為瓶容量的1/3至1/2;裝試管一般為試管高度的1/5至1/4,以免滅菌時(shí)培養(yǎng)基上溢.
6. 用膠塞塞住管口或瓶口.膠塞既有利于通氣,又有濾菌作用,故松緊、大小應(yīng)適當(dāng),以免使用時(shí)影響操作.
7. 應(yīng)按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌.普通培養(yǎng)基采用121攝氏度、15min高壓濕熱滅菌法,以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份.8. 滅菌后取出的固體培養(yǎng)基,根據(jù)需要可將試管立即斜放,冷凝后即成斜面培養(yǎng)基,斜面長(zhǎng)度一般以不超過(guò)試管長(zhǎng)度的1/2為宜;半固體培養(yǎng)基滅菌后,垂直冷凝成半固體深層瓊脂.錐形瓶中的培養(yǎng)基,冷卻到45至50攝氏度,倒進(jìn)無(wú)菌培養(yǎng)皿中,冷凝后即制成平板培養(yǎng)基,可用于菌種的分離、鑒定等.液體培養(yǎng)基冷卻后可直接根據(jù)需要接進(jìn)菌種.