常用培養(yǎng)基配方一 培養(yǎng)基的配置
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
微生物干燥培養(yǎng)基
常用培養(yǎng)基配方
目錄
01糖發(fā)酵管
02 ONPG培養(yǎng)基
03西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
04緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗用)
05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
07葡葡糖銨培養(yǎng)基
08 Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗用)
09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基
10營養(yǎng)明膠
12 氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基
13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗用)
14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)
15 尿素瓊脂
16 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基
17 氧化酶試驗
18 硝酸鹽培養(yǎng)基
19 細胞色素氧化酶試驗
20 過氧化氫酶試驗
21 過氧化物酶試驗
22 磷酸鹽緩沖液
23明膠磷酸鹽緩沖液
24 乳酸-苯酚溶液
25 肉浸液肉湯
26肉浸液瓊脂
27牛肉(或牛心)消化湯
28血消化湯
29豆粉瓊脂
30血瓊脂
31營養(yǎng)瓊脂
32營養(yǎng)肉湯
33 乳糖膽鹽發(fā)酵管
34乳糖發(fā)酵管
35 EC肉湯
36 緩沖蛋白胨水(BP)
37 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)
39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法)
40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
41 GN增菌液
42 腸道菌增菌肉湯
43 亞硫酸鉍瓊脂(BS)
44 DHL瓊脂
45 HE瓊脂
46 SS瓊脂
47 WS瓊脂
48 麥康凱瓊脂
49 伊紅美藍瓊脂(EMB)
51 三糖鐵瓊脂(換用方法)
52 克氏雙糖鐵瓊脂(KI)
53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)
54 葡萄糖半固體發(fā)酵管
55 5%乳糖發(fā)酵管
56 CAYE培養(yǎng)基
57 Honda氏產(chǎn)毒肉湯
58 Elek氏培養(yǎng)基(毒素測定用)
59 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養(yǎng)基
60 胰蛋白胨水
61 Rustigian氏尿素培養(yǎng)液
62 氯化鈉結(jié)晶紫增菌液
63 氯化鈉蔗糖瓊脂
64 嗜鹽菌選擇性瓊脂
65 3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂
66 氯化鈉血瓊脂
67 3.5%氯化鈉生化試驗培養(yǎng)基
68 改良磷酸鹽緩沖液(小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌專用)
69 CIN-1培養(yǎng)基
70 嗜鹽性試驗培養(yǎng)基
01 糖發(fā)酵管
成分:
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化鈉 3g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 2g
0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:
1葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min.
2其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌.將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管.
注:蔗糖不純,加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌.
試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng),一般觀察2～3d.遲緩反應需觀察14～30d.
02 ONPG培養(yǎng)基
成分:
鄰硝基酚β-D-半乳糖昔(ONPG) 60mg
(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10mL
1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL
制法:將ONPG溶于緩沖液內(nèi),加入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于10mm×75mm試管,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊.
試驗方法:自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種,于36±1℃培養(yǎng)1～3h和24h觀察結(jié)果.如果β-半乳糖苷酶產(chǎn)生,則于1～3h變黃色,如無此酶則24h不變色.
03 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
檸檬酸鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
制法:先將鹽類溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化.然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜面.
試驗方法:挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)4d,每天觀察結(jié)果.陽性者斜面上有菌落生長,培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍色.
04 緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗用)
成分:
磷酸氫二鉀 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法:溶化后校正pH,分裝試管,每管1mL,121℃高壓滅菌15min.
甲基紅(MR)試驗:自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2～5d,哈夫尼亞菌則應在22～25℃培養(yǎng).滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結(jié)果.鮮紅色為陽性,黃色為陰性.甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸餾水.
V-P試驗:用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2～4d.哈夫尼亞菌則應在22～25℃培養(yǎng).加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL,充分振搖試管,觀察結(jié)果.陽性反應立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進行觀察.
05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
成分:
檸檬酸鈉 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
單鹽酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈉 5g
0.2%酚紅溶液 6mL
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
制法:加熱溶解,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜面.
試驗方法:用瓊脂培養(yǎng)物接種整個斜面,在36±1℃培養(yǎng)7d,每天觀察結(jié)果.陽性者培養(yǎng)基變?yōu)榧t色.
06 丙二酸鈉培養(yǎng)基
成分:
酵母浸膏 1g
硫酸銨 2g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g
丙二酸鈉 3g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH6.8
制法:先將酵母浸膏和鹽類溶解于水,校正pH后再加入指示劑,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.
試驗方法:用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果.陽性者由綠色變?yōu)樗{色.
07 葡葡糖銨培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
葡萄糖 2g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
制法:先將鹽類和糖溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜面.
試驗方法:用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面,在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液,肉眼觀察不見混濁,以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20～100之間為宜.將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種,同時再以同法接種普通斜面一支作為對照.于36±1℃培養(yǎng)24h.陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長;陰性者不生長,但在對照培養(yǎng)基上生長良好.如在葡萄糖銨斜面生長極微小的菌落可視為陰性結(jié)果.
注:容器使用前應用清潔液浸泡.再用清水,蒸餾水沖洗干凈,并用新棉花做成棉塞,干熱滅菌后使用.如果操作時不注意,有雜質(zhì)污染時,易造成假陽性的結(jié)果.
08 Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗用)
成分:
蛋白胨 2g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 0.3g
瓊脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法:將蛋白胨和鹽類加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,瓊脂煮沸,溶化瓊脂,然后加入指示劑.混勻后,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,直立凝固備用.
試驗方法:從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種,同時接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面,高度約1cm,于36±1℃培養(yǎng).
09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基
成分:
馬尿酸鈉 1g
肉浸液 100mL
制法:將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內(nèi),分裝于小試管內(nèi),并于管壁畫一橫線.以標志管內(nèi)液面高度,高壓滅菌121℃20min.
試劑:三氯化鐵(FeCl3·6H2O)12g,溶于2%鹽酸溶液100mL中即成.
試驗方法:用純培養(yǎng)物接種,于42℃培養(yǎng)48h,觀察培養(yǎng)液是否到達試管壁上記號處,如不足時,用蒸餾水補足至原量.經(jīng)離心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化鐵試劑0.2mL,立即混合均勻,經(jīng)10～15min,觀察結(jié)果.
結(jié)果:出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽性.
10營養(yǎng)明膠
成分:
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明膠 120g
蒸餾水 1000mL
pH6.8～7.0
制法:加熱溶解,校正至pH7.4～7.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻,使其凝固.復查最終pH應為6.8～7.0.
試驗方法:用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,放在22～25℃培養(yǎng),每天觀察結(jié)果,記錄液化時間.或放在36士1℃培養(yǎng),每天取出,放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果.
11苯丙氨酸培養(yǎng)基
成分:
酵母浸膏 3g
DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g
磷酸氫二鈉 1g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
制法:加熱溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面.
試驗方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36±1℃培養(yǎng)4h或18～24h.滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴,自斜面培養(yǎng)物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色.
12 氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸餾水 1000mL
1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mL
L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mL
pH6.8
制法:除氨基酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶100mL,分別加入各種氨基酸:賴氨酸,精氨酸和鳥氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.對照培養(yǎng)基不加氨基酸.分裝于滅菌的小試管內(nèi),每管0.5mL,上面滴加一層液體石蠟,115℃高壓滅菌10min.
試驗方法:從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)18～24h,觀察結(jié)果.氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿,培養(yǎng)基應呈紫色.陰性者無堿性產(chǎn)物,但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色.對照管應為黃色.
13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗用)
成分:
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min.
靛基質(zhì)試劑
柯凡克試劑:將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后緩慢加入濃鹽酸25mL.
歐-波試劑:將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi).然后緩慢加入濃鹽酸20mL.
試驗方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在36±1℃培養(yǎng)1～2d,必要時可培養(yǎng)4～5d.加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色.
注:蛋白胨中應含有豐富的色氨酸.每批蛋白胨買來后,應先用已知菌種鑒定后方可使用.
14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)
成分:
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亞鐵 0.2g
硫代硫酸鈉 0.3g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:加熱溶解,校正pH,分裝試管,115℃高壓滅菌15min,取出直立候其凝固.
試驗方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物,沿管壁穿刺,于36±1℃培養(yǎng)1～2d,觀察結(jié)果.產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏?
注:腸桿菌科細菌測定硫化氫的產(chǎn)生,應采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基.
15 尿素瓊脂
成分:
蛋白胨 1g
氯化鈉 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氫鉀 2g
0.4%酚紅溶液 3mL
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL