酵母菌的分離培養(yǎng)
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
酵母菌的分離培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)培養(yǎng)和分離酵母菌的技術(shù)和方法
實(shí)驗(yàn)原理:
大多數(shù)酵母菌為腐生,其生活最適pH為4.5一6,常見(jiàn)于含糖分較高的環(huán)境中,例如果園土、菜地土及果皮等植物表面.酵母菌生長(zhǎng)迅速,易于分離培養(yǎng),在液體培養(yǎng)基中,酵母菌比霉菌生長(zhǎng)得快.
利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點(diǎn),常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液(這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)),然后在固體培養(yǎng)基上用劃線法分離之.
實(shí)驗(yàn)材料和用具:
甘蔗、成熟葡萄或蘋(píng)果等果皮、0.1%美藍(lán)染液、1毫升的無(wú)菌吸管、無(wú)菌培養(yǎng)皿等.
馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基:
原料:馬鈴薯(200克)、葡萄糖(20克)、瓊脂(15-20克)、蒸餾水(1000毫升).
配制方法:
先將馬鈴薯去皮,切片,稱(chēng)200克并加蒸餾水1000毫升,煮沸半小時(shí),用紗布過(guò)濾,補(bǔ)足蒸餾水量至1000毫升,制成20%的馬鈴薯汁.
在20%的馬鈴薯汁中加入瓊脂,煮沸溶化,補(bǔ)足水分并在115攝氏度條件下高壓滅菌20分種.
加入葡萄糖,制成培養(yǎng)酵母菌的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基.
3、乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液:配方同上,但不加瓊脂而加乳酸,按每1000毫升培養(yǎng)液中含5毫升乳酸的量加入,并分裝試管.
實(shí)驗(yàn)步驟:
接種:取一小塊果皮,不需沖洗,直接接入乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液管中,置28一30,培養(yǎng)24小時(shí),可見(jiàn)培養(yǎng)液變混濁.
培養(yǎng):用無(wú)菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液0.l毫升,注入另一管乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中,置28-30再培養(yǎng)24小時(shí)或稍長(zhǎng)(過(guò)長(zhǎng)則霉菌長(zhǎng)出).
觀察:用無(wú)菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.l%美藍(lán)染色液中,混勻后加蓋玻片制成水浸片,先用低倍鏡后換高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況.
活酵母菌可使美藍(lán)還原,從而使菌體不著色,用此方法可判斷酵母菌的死活.
分離:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板.用劃線法分離酵母菌培養(yǎng)液,從而得到單個(gè)菌落.挑取單個(gè)菌落反復(fù)再次劃線分離純化,最終可獲得純培養(yǎng).