GB與ChP中霉菌和酵母菌技術(shù)
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
GB與ChP中霉菌和酵母菌技術(shù)
霉菌和酵母平板計(jì)數(shù)法的檢驗(yàn)程序
檢樣;25g(毫升)樣品+225毫升無(wú)菌稀釋液,均質(zhì);10倍系列稀釋;選擇2到3個(gè)適宜稀釋度的樣品均液,每個(gè)平皿加入1毫升,每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平行;每皿中加入20-25ms馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂;28攝氏度菌落計(jì)數(shù);檢驗(yàn)報(bào)告.
1樣品的稀釋
1.1固體和半固體樣品:稱取25g樣品,加入225毫升無(wú)菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液),充分振搖,或用拍擊氏均質(zhì)器拍打1至2分鐘,制成1:10的樣品均液.
1.2液體樣品,以無(wú)菌吸管西區(qū)25毫升樣品至盛有225毫升無(wú)菌稀釋液的適宜容器內(nèi)(可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)或無(wú)菌均質(zhì)袋中,充分振搖或用拍擊式均質(zhì)器拍打1至2分鐘,制成1:10的樣品均液.
1.3按照10倍系列稀釋法,稀釋2至3個(gè)適宜稀釋度的樣品,每個(gè)稀釋度分別吸取1毫升樣品均液于2個(gè)無(wú)菌平行皿中,同時(shí)分別吸取1毫升無(wú)菌稀釋液加入2個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照.
1.4及時(shí)將20至25毫升冷卻至46攝氏度的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂傾注平皿
1.5 28攝氏度±1攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察并記錄培養(yǎng)至5d的結(jié)果.
1.6 菌落計(jì)數(shù),選取菌落數(shù)在10至150CFU的平板,根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母,霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為菌落蔓延.
1.7使用到的培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂(含氯霉素),孟加拉紅瓊脂配方:
蛋白胨 5.0g;磷酸二氫鉀 1.0g;硫酸鎂 0.5g;孟加拉紅 0.033g;氯霉素0.1g;葡萄糖10.0g;瓊脂20.0g;pH6.0±0.2(25攝氏度)
1.8結(jié)果
計(jì)算同一稀釋度的兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù);
若有兩個(gè)稀釋度平板上菌落數(shù)均在10-160CFU之間,則按照相應(yīng)規(guī)定進(jìn)行計(jì)算;
若所有平板上菌落數(shù)均大于160CFU,則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),其他平板可記錄為多不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)數(shù);
若所有平板上菌落數(shù)小于10CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算;
若所有稀釋度包括液體樣品原液平均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算;
若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在10CFU至160CFU之間,其中一部分小于10CFU或大于160CFU時(shí),則以最近10CFU或160CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算.
二,中國(guó)藥典
1.檢驗(yàn)量
除另有規(guī)定外,一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10毫升;膜劑為100cm2;貴重藥品,微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減.檢驗(yàn)時(shí),應(yīng)從2個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品,大蜜丸還不得少于4丸,膜劑還不少于4片.
2供試品的檢查
2.1TSA用于測(cè)定需要菌總數(shù),SDA用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù),陰性對(duì)照以稀釋液代替供試液進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn),陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng).如果陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng),應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查.
2.2平皿法:包括傾注法和涂布法,注入15至20毫升溫度不超過(guò)45攝氏度的培養(yǎng)基,SDA平板在20至25攝氏度培養(yǎng)5至7d,觀察菌落生長(zhǎng)情況,點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù),計(jì)數(shù)并報(bào)告,菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù).點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后,計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù),按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù).若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落數(shù)平均值不小于15,則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上.
2.3菌數(shù)報(bào)告規(guī)則:霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定易選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級(jí),作為菌數(shù)報(bào)告的依據(jù).如稀釋級(jí)的平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng),但平均菌落數(shù)小于1時(shí),以<1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù).
2.4使用的培養(yǎng)基:SDA,但因SDA上生長(zhǎng)的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求時(shí),可使用含抗生素(如氯霉素,慶大霉素)的SDA或其他選擇性培養(yǎng)基(玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基)