金黃色葡萄球菌的實(shí)驗(yàn)室鑒定
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
金黃色葡萄球菌的實(shí)驗(yàn)室鑒定
1.標(biāo)本采集采自不同感染部位的各種標(biāo)本,包括血液、腦脊液、穿刺液;痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等.
2.直接涂片鏡檢直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等,若有檢出革蘭氏陽性,顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜,直徑0.5-1μm的球菌.即具有重要的臨床價(jià)值.
3.分離培養(yǎng)可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板,血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基.該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長;若接種于瓊脂平板上35過夜后可形成直徑約2~3毫米的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起.若接種于血平板,菌落周圍可形成明顯的透明的β—溶血環(huán).在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落,以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別.
4.鑒別實(shí)驗(yàn)
血漿凝固酶試驗(yàn)：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的,與其致病力有關(guān)的一種侵襲性酶,其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬.血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型.前者結(jié)合在細(xì)菌的細(xì)胞壁上,能直接作用于血漿中的纖維蛋白原,使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,環(huán)繞菌體而形成凝塊.而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外,不能直接作用于纖維蛋白原,但可以激活血漿凝血酶原,使之轉(zhuǎn)化成凝血酶,后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白.具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種.
玻片法將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中,經(jīng)10~20S證實(shí)無自凝后,用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán),與乳化菌液混合,出現(xiàn)凝集者為陽性,另設(shè)生理鹽水為陰性對照.
試管法吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時(shí)培養(yǎng)物充分混勻,置37培養(yǎng),每隔半小時(shí)觀察一次,連續(xù)觀察6小時(shí),出現(xiàn)凝固,即將小試管傾斜或倒置時(shí),內(nèi)容物不流動(dòng),判為陽性.
耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15分鐘,用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板,35培養(yǎng)24小時(shí),在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性.本試驗(yàn)金黃色葡萄球菌為陽性.
甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇.
Staphaurex膠乳凝集實(shí)驗(yàn)是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗(yàn).其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳,然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻,若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性.
生化鑒定如上述,注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點(diǎn)：PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺試驗(yàn)陰性;VP試驗(yàn)陽性;鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性.
免疫學(xué)方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體.
分子生物學(xué)方法包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等.