非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法
發(fā)布時間：
2022-12-27
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控制菌檢查法系用于在規(guī)定的試驗條件下，檢查供試品中是否存在特定的微生物。當本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標準時，應(yīng)按下列規(guī)定進行檢驗，包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。供試品檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結(jié)果為準，不再復(fù)試。供試液制備及實驗環(huán)境要求同“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”。如果供試品具有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢查時，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認有效性及對微生物無毒性。
供試液制備時如果使用了表面活性劑，應(yīng)確認其對微生物無毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。
培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗
供試品控制菌檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進行適用性檢查。供試品的控制菌檢查方法應(yīng)進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的控制菌檢查。
若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，控制菌檢查方法應(yīng)重新進行適用性試驗。
菌種及菌液制備
菌種 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B） 26 003〕
銅綠假單胞菌（Pseudomxnas aeruginosa）〔CMCC（B） 10 104〕
大腸埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44 102〕
乙型副傷寒沙門菌（Salmonella paratyphi B）〔CMCC（B） 50 094〕
白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98 001〕
生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B） 64 941〕
菌液制備 將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門菌分別接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時；將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25攝氏度培養(yǎng)2～3天；將生孢梭菌接種于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件下30～35攝氏度培養(yǎng)24～48小時或接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基30～35攝氏度培養(yǎng)18～2 4小時。上述培養(yǎng)物用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。
菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2～8攝氏度，可在24小時內(nèi)使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，孢子懸液可保存在2～8攝氏度，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。
陰性對照
為確認試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如陰性對照有菌生長，應(yīng)進行偏差調(diào)查。
培養(yǎng)基適用性檢查
控制菌檢查用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢查。
控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查。
液體培養(yǎng)基促生長能力檢查 分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。
培養(yǎng)基抑制能力檢查 接種不少于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不小于規(guī)定的最長培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。
培養(yǎng)基指示特性檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1） 于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。
控制菌檢查方法適用性試驗
供試液制備 按下列“供試品檢查”中的規(guī)定制備供試液。
試驗菌 根據(jù)各品種項下微生物限度標準中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)試驗菌株，確認耐膽鹽革蘭陰性菌檢查方法時，采用大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為試驗菌。
適用性試驗 按控制菌檢查法取規(guī)定量供試液及不大于100cfu的試驗菌接入規(guī)定的培養(yǎng)基中；采用薄膜過濾法時，取規(guī)定量供試液，過濾，沖洗，在最后一次沖洗液中加入試驗菌，過濾后，注入規(guī)定的培養(yǎng)基或取出濾膜接入規(guī)定的培養(yǎng)基中。依相應(yīng)的控制菌檢查方法，在規(guī)定的溫度和最短時間下培養(yǎng)，應(yīng)能檢出所加試驗菌相應(yīng)的反應(yīng)特征。
結(jié)果判斷 上述試驗若檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查方法進行供試品檢查；若未檢出試驗菌，應(yīng)消除供試品的抑菌活性[見非無菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）中的“抗菌活性的去除或滅活”]，并重新進行方法適用性試驗。
如果經(jīng)過試驗確證供試品對試驗菌的抗菌作用無法消除，可認為受抑制的微生物不易存在于該供試品中，選擇抑菌成分消除相對徹底的方法進行供試品的檢查。
供試品檢查
供試品的控制菌檢查應(yīng)按經(jīng)方法適用性試驗確認的方法進行。
陽性對照試驗 陽性對照試驗方法同供試品的控制菌檢查，對照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。陽性對照試驗應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。
陰性對照試驗 以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如果陰性對照有菌生長，應(yīng)進行偏差調(diào)査。
耐膽鹽革蘭陰性菌（Bile-Tblerant Gram-Negative Bacteria）
供試液制備和預(yù)培養(yǎng) 取供試品，用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基作為稀釋劑照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”制成1：10供試液，混勻，在20～25攝氏度培養(yǎng)，培養(yǎng)時間應(yīng)使供試品中的細菌充分恢復(fù)但不增殖（約2小時）。
定性試驗
除另有規(guī)定外，取相當于1g或1毫升供試品的上述預(yù)培養(yǎng)物接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30～35攝氏度培養(yǎng)24～48小時后，劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時。如果平板上無菌落生長，判供試品未檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。
定量試驗
選擇和分離培養(yǎng) 取相當于0.1g、0.01g和0.001g（或0.1毫升、0.01毫升和0.001毫升） 供試品的預(yù)培養(yǎng)物或其稀釋液分別接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30～35攝氏度培養(yǎng)24～48小時。上述每一培養(yǎng)物分別劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時。
結(jié)果判斷 若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，則對應(yīng)培養(yǎng)管為陽性，否則為陰性。根據(jù)各培養(yǎng)管檢查結(jié)果，從表2查1g或1毫升供試品中含有耐膽鹽革蘭陰性菌的可能菌數(shù)。
注：（1） +代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上有菌落生長；-代表紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上無菌落生長。
（2）若供試品量減少10倍（如0.01g或0.01毫升，0.001g或0.001毫升，0.0001g或0.0001毫升），則每1g（或1毫升）供試品中可能的菌數(shù)（N）應(yīng)相應(yīng)增加10倍 。
大腸埃希菌（Escherichia coli）
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”制成1：10供試液。取相當于1g或1毫升供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1毫升接種至100毫升麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44攝氏度培養(yǎng)24～48小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～72小時。
結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。
沙門菌（Salmonella）
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取10g或10毫升供試品直接或處理后接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物0.1毫升接種至10毫升 RV沙門增菌液體培養(yǎng)基中，30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時。取少量RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～48小時。
沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基板上生長良好，菌落為淡紅色或無色、透明或半透明、中心有或無黑色。用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜面上進行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)18～24小時，或采用其他適宜方法進一步鑒定。
結(jié)果判斷 若木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黃色或黑色，應(yīng)進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為沙門菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面未見紅色、底層未見黃色；或斜面黃色、底層未見黃色或黑色，判供試品未檢出沙門菌。
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”制成1：10供試液。取相當于1g或1毫升供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定的）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。30～35攝氏度 培養(yǎng)18～24小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～72小時。
取上述平板上生長的菌落進行氧化酶試驗，或采用其他適宜方法進一步鑒定。
氧化酶試驗 將潔凈濾紙片置于平皿內(nèi)，用無菌玻棒取上述平板上生長的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸N，N-二甲基對苯二胺試液，在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽性，否則為陰性。
結(jié)果判斷 若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，且氧化酶試驗陽性，應(yīng)進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為銅綠假單胞菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或氧化酶試驗陰性，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）” 制成1：10供試液。取相當于1g或1毫升供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。30～35攝氏度培養(yǎng)18～24小時。
選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)18～72小時。
結(jié)果判斷 若甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上有黃色菌落或外周有黃色環(huán)的白色菌落生長，應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為金黃色葡萄球菌；若平板上沒有與上述形態(tài)特征相符或疑似的菌落生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
梭菌（Clostridia）
供試液制備和熱處理 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”制成1：10供試液。取相當于1g或1毫升供試品的供試液2份，其中1份置80攝氏度保溫10分鐘后迅速冷卻。
增菌、選擇和分離培養(yǎng) 將上述2份供試液分別接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的梭菌增菌培養(yǎng)基中，置厭氧條件下30～35攝氏度培養(yǎng)48小時。取上述每一培養(yǎng)物少量，分別涂抹接種于哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，置厭氧條件下30～35攝氏度培養(yǎng)48～72小時。
過氧化氫酶試驗 取上述平板上生長的菌落，置潔凈玻片上，滴加3% 過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生，為過氧化氫酶試驗陽性，否則為陰性。
結(jié)果判斷 若哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上有厭氧桿菌生長（有或無芽孢），且過氧化氫酶反應(yīng)陰性的，應(yīng)進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為梭菌；如果哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有厭氧桿菌生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或過氧化氫酶反應(yīng)陽性，判供試品未檢出梭菌。
白色念珠菌（Candida albicans）
供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”制成1：10供試液。取相當于1g或1毫升供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35攝氏度培養(yǎng)3～5 天。
選擇和分離 取上述預(yù)培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35攝氏度培養(yǎng)24～48小時。
白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落呈乳白色，偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺褶。挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時（必要時延長至72小時），或采用其他適宜方法進一步鑒定。
結(jié)果判斷 若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陽性反應(yīng)，應(yīng)進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為白色念珠菌；若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陰性反應(yīng)，判供試品未檢出白色念珠菌。
稀釋液
稀釋液配制后，應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。
1.pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 照無菌檢查法（通則1101）制備。
2.pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液、pH7.2無菌磷酸鹽緩沖液、pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液 照緩沖液（通則8004）配制后，過濾，分裝，滅菌。
如需要，可在上述稀釋液滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。
3.0.9%無菌氯化鈉溶液 取氯化鈉9.0g，加水溶解使成1000毫升，過濾，分裝，滅菌。
培養(yǎng)基及其制備方法
培養(yǎng)基可按以下處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后，應(yīng)按驗證過的高壓滅菌程序滅菌。
1.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（SDB）
照無菌檢查法（通則1101）制備。
2.沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）
照無菌檢查法（通則1101）制備。如使用含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)確認培養(yǎng)基中所加的抗生素量不影響供試品中霉菌和酵母菌的生長。
3.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）
馬鈴薯（去皮） 200克 瓊脂 14.0克
葡萄糖 20.0克 水 1000毫升
取馬鈴薯，切成小塊，加水1000毫升，煮沸20～30分鐘，用6～8層紗布過濾，取濾液補水至1000毫升， 調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為5.6±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
4.玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基
胨 5.0克 玫瑰紅鈉 0.0133克
葡萄糖 10.0克 瓊脂 14.0克
磷酸二氫鉀 1.0克 水1000毫升
硫酸鎂 0.5克
除葡萄糖、玫瑰紅鈉外，取上述成分，混合，微溫溶解，加入葡萄糖、玫瑰紅鈉，搖勻，分裝，滅菌。
5.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
照無菌檢查法（通則1101）制備。
6.腸道菌增菌液體培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 10.0克二水合磷酸氫二鈉 8.0克
牛膽鹽 20.0克亮綠 15毫克
葡萄糖 5.0克水 1000毫升
磷酸二氫鉀 2.0克
除葡萄糖、亮綠外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使加熱后在25攝氏度的pH值為7.2±0.2， 加入葡萄糖、亮綠，加熱至100攝氏度 30分鐘，立即冷卻。
7.紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
酵母浸出粉 3.0克中性紅 30毫克
明膠胰酶水解物 7.0克結(jié)晶紫2毫克
脫氧膽酸鈉 1.5克瓊脂15.0克
葡萄糖 10.0克水 1000毫升
氯化鈉 5.0克
除葡萄糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使加熱后在25攝氏度的pH值為7.4±0.2。加入葡萄糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂，加熱煮沸（不能在高壓滅菌器中加熱）。
8.麥康凱液體培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0克 溴甲酚紫10毫克
乳糖10.0克 水1000毫升
牛膽鹽 5.0克
除乳糖、溴甲酚紫外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為7.3±0.2，加入乳糖、溴甲酚紫，分裝，滅菌。
9.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 17.0克 中性紅 30.0毫克
胨 3.0克 結(jié)晶紫 1毫克
乳糖10.0克 瓊脂 13.5克
脫氧膽酸鈉 1.5克 水 1000毫升
氯化鈉 5.0克
除乳糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為7.1±0.2，加入乳糖、中性紅、結(jié)晶紫、瓊脂，加熱煮沸1分鐘，并不斷振搖，分裝，滅菌。
10.RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基
大豆胨 4.5克 六水合氯化鎂 29.0克
氯化鈉 8.0克 孔雀綠 36毫克
磷酸氫二鉀 0.4克 水 1000毫升
磷酸二氫鉀 0.6克
除孔雀綠外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為5.2±0.2。加入孔雀綠，分裝，滅菌，滅菌溫度不能超過115攝氏度。
11.木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基
酵母浸出粉 3.0克氯化鈉 5.0克
L-賴氨酸5.0克硫代硫酸鈉 6.8克
木糖3.5克枸櫞酸鐵銨 0.8克
乳糖7.5克酚紅80毫克
蔗糖7.5克瓊脂 13.5克
脫氧膽酸鈉 2.5克水 1000毫升
除三種糖、酚紅、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使加熱后在25攝氏度的pH值為7.4±0.2，加入三種糖、酚紅、瓊脂，加熱至沸騰，冷至50攝氏度傾注平皿（不能在高壓滅菌器中加熱）。
12.三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）
胨 20.0克硫酸亞鐵 0.2克
牛肉浸出粉 5.0克硫代硫酸鈉0.2克
乳糖10.0克0.2%酚磺酞
蔗糖10.0克 指示液12.5毫升
葡萄糖 1.0克瓊脂 12.0克
氯化鈉 5.0克水 1000毫升
除三種糖、0.2%酚磺酞指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為7.3±0.1，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，分裝，滅菌，制成高底層（2～3cm）短
斜面。
13.溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0克 溴化十六烷基
氯化鎂 1.4克 三甲銨 0.3克
硫酸鉀 10.0克 瓊脂 13.6克
甘油10毫升水 1000毫升
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH 值為7.4±0.2，加入瓊脂，加熱煮沸1分鐘，分裝，滅菌。
14.甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 5.0克 氯化鈉 75.0克
動物組織胃蛋白酚紅 25毫克
酶水解物 5.0克 瓊脂 15.0克
牛肉浸出粉 1.0克 水 1000毫升
D-甘露醇10.0克
除甘露醇、酚紅、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為7.4±0.2，加熱并振搖，加入甘露醇、酚紅、瓊脂，煮沸1分鐘，分裝，滅菌。
15.梭菌增菌培養(yǎng)基
胨10.0克 鹽酸半胱氨酸 0.5克
牛肉浸出粉10.0克 乙酸鈉 3.0克
酵母浸出粉 3.0克 氯化鈉 5.0克
可溶性淀粉 1.0克 瓊脂 0.5克
葡萄糖 5.0克 水 1000毫升
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，并不斷攪拌。如需要，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為6.8±0.2，加入葡萄糖，混勻，分裝，滅菌。
16.哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨10.0克 氯化鈉 5.0克
肉胃蛋白酶水解物 5.0克 瓊脂 10.0~15.0克
心胰酶水解物 3.0克 （依凝固力）
酵母浸出粉 5.0克 水 1000毫升
玉米淀粉 1.0克
除瓊脂外，取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，并不斷攪拌。如需要，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25攝氏度的pH值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化，分裝，滅菌。如有必要，滅菌后，冷至45～50攝氏度加入相當于20毫克慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素，混勻，傾注平皿。
17.念珠菌顯色培養(yǎng)基
胨 10.2克瓊脂 15克
氫罌素0.5克水1000毫升
色素 22.0克除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使加熱后在25攝氏度的pH值為6.3±0.2。濾過，加入瓊脂，加熱煮沸，不斷攪拌至瓊脂完全溶解，傾注平皿。