假單胞菌屬及檢驗方法
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
假單胞菌屬及檢驗方法
介紹
椰毒假單胞菌酵米面亞種（Psedomonas cocovenenans supsp.farino fermentans)是我國發(fā)現(xiàn)的一種新的食物中毒菌,它存在于發(fā)酵的玉米、糯玉米、黃米、高梁米、變質(zhì)銀耳以及周圍環(huán)境中,它是酵米面及變質(zhì)銀耳中毒的病原菌.該菌產(chǎn)生的毒素米酵菌酸是其致病原因.
該食物中毒的主要癥狀,開始患者感到上腹部不適,少數(shù)出現(xiàn)腹瀉、惡心、嘔吐,嘔吐物多為咖啡色,嚴(yán)重者出現(xiàn)黃疸.昏迷、四肢抽搐、少尿、血尿、便血和尿潴留,呈現(xiàn)休克而死亡.目前尚無特效的治療辦法.
該菌為革蘭氏陰性桿菌,長2.5-3μm,寬0.5-1.0μm,呈桿狀、球桿狀或稍彎曲,兩端鈍圓,無芽胞,有鞭毛.
本菌為兼性厭氧,但易在表面生長.最適生長溫度為37,最適產(chǎn)毒溫度為26.pH5-7范圍內(nèi)生長較好.
本菌抵抗力較弱,565分鐘即可殺死,對各種常用消毒劑抵抗力也不強.
檢驗方法:
樣品先在GVC增菌液中進(jìn)行增菌,然后劃線接種于PDA平板,挑選可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色觀察及氧化酶試驗.如為革蘭氏陰性小桿菌,氧化酶試驗陰性,再接種于卵黃瓊脂平板和SS平板.
從卵黃瓊脂平板上挑取卵磷脂酶陽性、并帶有彩虹環(huán)的單個菌落,接種于馬鈴薯-葡萄糖瓊脂斜面,獲得純培養(yǎng)物.
將純培養(yǎng)物分別接種于Hugh-Leifson培養(yǎng)基,蛋白胨水,緩沖蛋白胨水,西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基,糖發(fā)酵管及苯丙酸培養(yǎng)基,進(jìn)行生化反應(yīng)試驗.
同時利用純培養(yǎng)物進(jìn)行血清分型鑒定.
初步鑒定為椰毒假單胞菌酵米面亞種的菌株,進(jìn)行產(chǎn)毒培養(yǎng)和小鼠毒力試驗,同時進(jìn)行米酵菌酸的測定.
分離培養(yǎng):
該菌在馬鈴薯－葡萄糖瓊脂平板上菌落為1~2mm灰白色或乳黃色,光滑、濕潤,邊緣整齊,培養(yǎng)48h后,中心有凸起,呈草帽狀,菌落周圍產(chǎn)生黃綠色色素,擴散到基質(zhì)中.
在卵黃瓊脂平板上,菌落表面光滑,濕潤,48h后,菌落周圍形成乳白色混濁環(huán),在斜射日光下,可見環(huán)的周圍呈現(xiàn)虹彩現(xiàn)象.
該菌在SS瓊脂平板上不生長.
O/F試驗
將該菌培養(yǎng)在Hugh-leifson培養(yǎng)基,方法是挑取少量培養(yǎng)物做穿刺接種,同時接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1％瓊脂1~2mL于表面,放30培養(yǎng).該菌為氧化型.封口培養(yǎng)不產(chǎn)酸,開口培養(yǎng)產(chǎn)酸.
本菌與假單胞菌的鑒別
椰毒假單胞菌酵米亞種與椰毒假單胞菌各種培養(yǎng)性狀,生物第學(xué)性狀基本一致,只在側(cè)金盞花醇的利用上有區(qū)別.椰毒假單胞菌酵米亞種側(cè)金盞花醇為陽性.
米酵菌酸的判定
從中毒樣品中提取米酵菌酸,包括發(fā)酵食品或變質(zhì)銀耳,或分離出的椰毒假單胞菌酵米面亞種中提取的米酵菌酸,其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg食品才有意義