假單胞菌屬及常規(guī)檢測(cè)鑒定

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

作者：

一次性平皿接觸碟

假單胞菌屬及常規(guī)檢測(cè)鑒定

介紹

椰毒假單胞菌酵米面亞種（Psedomonas cocovenenans supsp.farino fermentans)是我國(guó)發(fā)現(xiàn)的一種新的食物中毒菌,它存在于發(fā)酵的玉米、糯玉米、黃米、高梁米、變質(zhì)銀耳以及周圍環(huán)境中,它是酵米面及變質(zhì)銀耳中毒的病原菌.該菌產(chǎn)生的毒素米酵菌酸是其致病原因.

該食物中毒的主要癥狀,開(kāi)始患者感到上腹部不適,少數(shù)出現(xiàn)腹瀉、惡心、嘔吐,嘔吐物多為咖啡色,嚴(yán)重者出現(xiàn)黃疸.昏迷、四肢抽搐、少尿、血尿、便血和尿潴留,呈現(xiàn)休克而死亡.目前尚無(wú)特效的治療辦法.

該菌為革蘭氏陰性桿菌,長(zhǎng)2.5-3μm,寬0.5-1.0μm,呈桿狀、球桿狀或稍彎曲,兩端鈍圓,無(wú)芽胞,有鞭毛.

本菌為兼性厭氧,但易在表面生長(zhǎng).最適生長(zhǎng)溫度為37攝氏度,最適產(chǎn)毒溫度為26攝氏度.pH5-7范圍內(nèi)生長(zhǎng)較好.

本菌抵抗力較弱,56攝氏度5分鐘即可殺死,對(duì)各種常用消毒劑抵抗力也不強(qiáng).

檢驗(yàn)方法：

樣品先在GVC增菌液中進(jìn)行增菌,然后劃線接種于PDA平板,挑選可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色觀察及氧化酶試驗(yàn).如為革蘭氏陰性小桿菌,氧化酶試驗(yàn)陰性,再接種于卵黃瓊脂平板和SS平板.

從卵黃瓊脂平板上挑取卵磷脂酶陽(yáng)性、并帶有彩虹環(huán)的單個(gè)菌落,接種于馬鈴薯－葡萄糖瓊脂斜面,獲得純培養(yǎng)物.

將純培養(yǎng)物分別接種于Hugh-Leifson培養(yǎng)基,蛋白胨水,緩沖蛋白胨水,西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基,糖發(fā)酵管及苯丙酸培養(yǎng)基,進(jìn)行生化反應(yīng)試驗(yàn).

同時(shí)利用純培養(yǎng)物進(jìn)行血清分型鑒定.

初步鑒定為椰毒假單胞菌酵米面亞種的菌株,進(jìn)行產(chǎn)毒培養(yǎng)和小鼠毒力試驗(yàn),同時(shí)進(jìn)行米酵菌酸的測(cè)定.

說(shuō)明：

分離培養(yǎng)：

該菌在馬鈴薯－葡萄糖瓊脂平板上菌落為1~2毫米灰白色或乳黃色,光滑、濕潤(rùn),邊緣整齊,培養(yǎng)48h后,中心有凸起,呈草帽狀,菌落周圍產(chǎn)生黃綠色色素,擴(kuò)散到基質(zhì)中.

在卵黃瓊脂平板上,菌落表面光滑,濕潤(rùn),48h后,菌落周圍形成乳白色混濁環(huán),在斜射日光下,可見(jiàn)環(huán)的周圍呈現(xiàn)虹彩現(xiàn)象.

該菌在SS瓊脂平板上不生長(zhǎng).

O/F試驗(yàn)

將該菌培養(yǎng)在Hugh-leifson培養(yǎng)基,方法是挑取少量培養(yǎng)物做穿刺接種,同時(shí)接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1％瓊脂1~2毫升于表面,放30攝氏度培養(yǎng).該菌為氧化型.封口培養(yǎng)不產(chǎn)酸,開(kāi)口培養(yǎng)產(chǎn)酸.

本菌與假單胞菌的鑒別

椰毒假單胞菌酵米亞種與椰毒假單胞菌各種培養(yǎng)性狀,生物第學(xué)性狀基本一致,只在側(cè)金盞花醇的利用上有區(qū)別.椰毒假單胞菌酵米亞種側(cè)金盞花醇為陽(yáng)性.

米酵菌酸的判定

從中毒樣品中提取米酵菌酸,包括發(fā)酵食品或變質(zhì)銀耳,或分離出的椰毒假單胞菌酵米面亞種中提取的米酵菌酸,其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg（食品）才有意義

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