支原體的分離培養(yǎng)方法和常用培養(yǎng)基
發(fā)布時間：
2022-12-27
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支原體的分離培養(yǎng)方法及常用培養(yǎng)基
支原體常用培養(yǎng)基為PPLO,很多公司都有出售.但血清(常用馬血清或豬血清)和抗生素(醋酸跎)需要自己添加.
在液體培養(yǎng)基中通常要加入酚紅做指示劑的,當培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色時,即可判定支原體的生長程度.需要注意的是,支原體的分離可能不太容易,需要多盲傳幾代.液體培養(yǎng)基變黃后,在固體培養(yǎng)基上單克隆,以純化分離的支原體.
支原體的培養(yǎng)條件
支原體的培養(yǎng)37°C即可.初次分離培養(yǎng)時,在37°C,5-10% CO2條件下效果更好.
支原體的鑒定
主要靠菌落染色、生化反應及特異性生長抑制試驗等.
Dienes菌落染色
Dienes染色液:
美藍:2.5克,天青-II:1.5克,麥芽糖:10克,碳酸鈉:0.5克,蒸餾水:100毫升
染色時,直接吸染色液覆蓋菌落,1分鐘后,用生理鹽水洗去染色液,低倍鏡下可見支原體菌落呈藍色,而其他菌菌落不著色.
生化反應
根據(jù)不同采樣部位及對底物的分解或者作為能源,可以鑒別不同支原體.
解脲支原體分解尿素不分解精氨酸,生成NH3使培養(yǎng)基的ph升高,酚紅指示劑變紅.
人型支原體分解L-精氨酸不分解尿素,生成NH3使PH值升高,酚紅指示劑變紅.
肺炎支原體分解葡萄糖,使pH降低,酚紅指示劑由紅變黃.
在含0.002%美藍的培養(yǎng)基中肺炎支原體能生長且將美藍還原而退色,其他口腔、唾液或發(fā)酵支原體均被抑制生長,此法可鑒定肺炎支原體.
常用的支原體培養(yǎng)基配方
基礎培養(yǎng)基
Hayflick培養(yǎng)基(PPLO培養(yǎng)基),牛心粉50克,蛋白胨10克,氯化鈉5克,加14克瓊脂粉為固體培養(yǎng)基.
肺炎支原體培養(yǎng)基
基礎培養(yǎng)基 70毫升,牛血清 (滅活) 20毫升,25%的酵母浸液 10毫升,50%葡萄糖 1-2毫升 0.4,酚紅 0.5毫升,制霉素 0.001克,青霉素 10萬IU,pH 7.8
人型支原體培養(yǎng)基
基礎培養(yǎng)基 70毫升,馬血清 20毫升 25％的酵母浸液 10毫升,30% L-精氨酸 0.33毫升,0.4%酚紅 0.5毫升,制霉素 0.001克,青霉素 10萬IU,pH 6.3
解脲支原體培養(yǎng)基
基礎培養(yǎng)基 70毫升,馬血清 20毫升,25%的酵母浸液 10毫升,30%尿素0.33毫升,0.4%酚紅 0.5毫升,制霉素 0.001克,青霉素 10萬IU,pH 6.0
注:支原體能在人工培養(yǎng)基上生長,但是營養(yǎng)要求較高,需要提供膽固醇和酵母才能生長.以上配方中,馬(牛)血清提供膽固醇,酵母浸液提供酵母.