純培養(yǎng)物的分離培養(yǎng)技術(shù)與方法
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
微生物一次性接觸碟帶培養(yǎng)基
純培養(yǎng)物的分離
自從瓊脂作為固化劑在微生物培養(yǎng)基中使用之后,對于純培養(yǎng)物的分離研究有了很快的發(fā)展.
純培養(yǎng)物是指來源于同一細(xì)胞的細(xì)胞群體—例如菌落;一個微生物細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面通過生長繁殖會形成一個肉眼可見的細(xì)胞群——菌落.
根據(jù)成本以及操作難度,目前最常用的獲得純培養(yǎng)物的方法主要有涂布平板和平板劃線,傾倒平板(廣泛應(yīng)用于真菌和細(xì)菌的但菌落分離過程中)
涂布平板：
這是獲得純培養(yǎng)物最簡單易行的方法.講樣品進(jìn)行稀釋后,加入少量在瓊脂平板上,使用無菌玻璃涂棒講樣品均勻的涂布在培養(yǎng)基表面,是單個細(xì)胞分散,進(jìn)而在適宜環(huán)境下培養(yǎng)形成單個菌落.
(因?yàn)榫鋽?shù)量等同于樣品中單個細(xì)胞的個數(shù),此方法也是最常用的微生物技術(shù)方法)
具體步驟如下：
將樣品稀釋(稀釋程度以最終單個平板形成30-300個菌落為宜,所以親,大膽的稀釋吧);
加入少量樣品與平板中央;
將玻璃三角涂抹棒浸入酒精中;
講蘸有酒精的涂抹幫在火焰上短暫灼燒后冷卻;
使用無菌涂抹幫將平板中央的樣品液均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基表面;
放入適宜環(huán)境下培養(yǎng).
平板劃線：
此方法是通過將沾有樣品液的接種環(huán)或者棉試在培養(yǎng)基表面劃線,在劃線過程中細(xì)胞會逐漸減少分散,經(jīng)過培養(yǎng)會形成但個菌落.
雖然涂布法和劃線法成功的關(guān)鍵都依賴于講混合在一起的細(xì)胞能夠有效的分開,但是小組內(nèi)操作經(jīng)驗(yàn)少的新手***次做劃線的結(jié)果基本悲劇收場
傾倒平板法：
對其實(shí)樣品進(jìn)行連續(xù)10倍的充分稀釋,加入適當(dāng)溫度的溶化瓊脂培養(yǎng)基中(就是培養(yǎng)基沒凝固同時溫度不會殺死樣品中的微生物)混合均勻后倒入無菌平板中,在適宜環(huán)境下培養(yǎng)后獲得單菌落可以用于純培養(yǎng)物的建立.
培養(yǎng)表面菌落為圓形,而培養(yǎng)基內(nèi)部菌落呈豆?fàn)罨蛘咄该餮b.