如何測定質(zhì)粒在重組菌中穩(wěn)定性
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-24
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如何測定質(zhì)粒在重組菌中穩(wěn)定性？
質(zhì)粒在重組菌中的穩(wěn)定性與多種因素有關(guān),如質(zhì)粒自身的特性、宿主菌的遺傳特性、細(xì)菌的培養(yǎng)條件等.下面以質(zhì)粒pBR325和大腸桿菌DH5α為例,介紹測定質(zhì)粒在重組菌中穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)方法：
1、將凍存的帶質(zhì)粒的重組大腸桿菌DH5α(pBR325)接種到5ml LB培養(yǎng)基,加氨芐青霉素(Amp)至終濃度為100μg/ml,37振蕩培養(yǎng)過夜.2、取新鮮培養(yǎng)的菌液50μl接種到5ml不含抗生素的LB培養(yǎng)基(即按1:100的量接種),37振蕩培養(yǎng)12h,此為傳1代.3、按第2步的方法,從上一代的培養(yǎng)液中取菌液再傳代,如此連續(xù)傳代培養(yǎng)100代.4、每隔5代,分別用含抗生素和不含抗生素的LB瓊脂平板進(jìn)行活菌計(jì)數(shù).5、根據(jù)不同平板活菌計(jì)數(shù)結(jié)果,分析質(zhì)粒的穩(wěn)定性,即：(含抗生素平板上的細(xì)菌數(shù)/不含抗生素平板上的細(xì)菌數(shù))×100%.上述方法是根據(jù)質(zhì)粒pBR325和大腸桿菌DH5α為例進(jìn)行介紹,在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中,所使用的抗生素種類、細(xì)菌培養(yǎng)方法、傳代數(shù)等要根據(jù)所用質(zhì)粒和宿主菌進(jìn)行確定.