食品中沙門氏菌快速檢測(cè)方法的研究

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

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食品中沙門氏菌快速檢測(cè)方法的研究

食品中沙門氏菌快速檢測(cè)重要性

沙門氏菌是腸桿菌科革蘭氏陰性桿菌,廣泛存在于環(huán)境或寄居于人和動(dòng)物腸道內(nèi),絕大多數(shù)對(duì)人和動(dòng)物具有致病性,對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高,耐膽鹽,對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng).感染沙門氏菌或食用被帶菌者糞便污染的食品,可使人發(fā)生食物中毒.帶菌者,或是感染沙門菌人的糞便會(huì)在一定程度上污染食物,導(dǎo)致人體食物中毒.沙門菌極易導(dǎo)致人體發(fā)生細(xì)菌性食物中毒,主要表現(xiàn)有敗血癥、腸胃炎以及腸傷寒等,而且具有一定的傳染性,可以通過消化道致病.沙門菌就從數(shù)量上來說是世界上比較常見的細(xì)菌種類之一,在我國(guó),食物中毒問題中首要的也是由于沙門菌而產(chǎn)生的中毒問題,人類受到細(xì)菌感染的主要的來源也是受到沙門菌污染的相關(guān)食品,如：肉和奶等,因此食品、醫(yī)療衛(wèi)生以及商檢等部門對(duì)沙門菌的檢測(cè)是相當(dāng)嚴(yán)格.沙門氏菌中毒常常是大面積的,致病速度快,給人類健康帶來極大威脅.繁雜的各類生化反應(yīng)型,使常規(guī)檢驗(yàn)程序復(fù)雜繁瑣、耗時(shí)費(fèi)力,不僅給檢驗(yàn)部門帶來沉重的負(fù)擔(dān),而且還使產(chǎn)品運(yùn)轉(zhuǎn)和倉貯的時(shí)間延長(zhǎng),費(fèi)用增加.提高檢測(cè)技術(shù)是有效控制該菌的重要手段,尤其是大面積普查時(shí)更需要快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法.沙門菌污染的快速檢測(cè),一方面有利于減少食物中毒和保證食品衛(wèi)生,另一方面有利于及早地發(fā)現(xiàn)傳染源,并有效的阻斷其傳播途徑.目前對(duì)沙門氏菌的治療為大量使用或?yàn)E用抗生素,從而忽視了對(duì)傳染源和傳播途徑的綜合防控,因此對(duì)沙門氏菌分離株耐藥性的監(jiān)測(cè)是意義重大的.

快速檢測(cè)沙門氏菌的方法

國(guó)標(biāo)法鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠是公認(rèn)的,但因沙門氏菌血清型種類多,生化特異性大,使得檢驗(yàn)程序更加復(fù)雜,檢驗(yàn)過程需要反復(fù)的接種培養(yǎng),一般都需要4～7天才能出結(jié)果.PCR技術(shù)篩選樣品中致病菌的檢測(cè)系統(tǒng)之一,優(yōu)點(diǎn)在于特異性強(qiáng),假陽性低,耗時(shí)短,從增菌到檢測(cè)48h內(nèi)可出檢驗(yàn)結(jié)果.在已知陽性可能性很高的情況下,適量增加分離平板數(shù)和提高劃線質(zhì)量,著重對(duì)可疑菌進(jìn)行檢測(cè),有效提高檢測(cè)效率.

Transia法

沙門氏菌,最快的速度,操作時(shí)間可以縮短每個(gè)檢測(cè).它是基于雙抗體夾心ELISA法中,使用的抗體的混合物,以確保所有沙門氏菌血清型的檢測(cè).固態(tài)反應(yīng)是一種微量反應(yīng)板的有形或無形的條紋.特異的單克隆抗體用于沙門氏菌,收拾鎖孔.小在第一階段(沙門氏菌特異的單克隆抗體及多克隆抗體的混合物)與復(fù)雜的樣品和抗體.延時(shí),沙門氏菌抗原和抗體包被的,以形成復(fù)合材料接頭組件：?jiǎn)慰寺】贵w沙門氏菌抗原-抗體.洗滌后,每孔為底物溶液(過氧化脲)和顯色溶液(四氨基甲基苯),以顯示復(fù)合酶催化氧化顯色,藍(lán)色.加入反應(yīng)終止液終止催化反應(yīng)后,將反應(yīng)混合物酸化,從藍(lán)色到黃色的顏色變化.

ELISA方法可用于選擇性富集和熱沖擊的效果,沙門氏菌抗原特異的食品和環(huán)境樣品的釋放.如使用李Zhaogun的樣品制備方法,可大大縮短檢測(cè)時(shí)間,此方法可以在沒有酶標(biāo)儀在實(shí)驗(yàn)室條件下,從這個(gè)角度來看,ELISA微孔板Transia沙門氏菌板檢測(cè)方法的LiZhaogun(Salmonellatest1更適合于一般實(shí)驗(yàn)室使用)免疫反應(yīng)卡.

沙門氏菌Transia單,夾心免疫反應(yīng)檢測(cè)方法

膜帶固相反應(yīng),包括抗沙門氏菌抗體染色染料共軛墊浸泡,抗沙門氏菌抗體固定膜反應(yīng)區(qū).濃縮,濃縮液移樣孔管,其吸收,如沙門氏菌抗原的存在的樣品,它們的效果和偶聯(lián)物,抗體,然后移動(dòng)到膜的結(jié)合被固定在膜反應(yīng)區(qū),顯示在響應(yīng)窗口的色帶.最后,結(jié)果可以讀取在5-7分鐘.該方法也適用于非酶標(biāo)記儀器實(shí)驗(yàn)室.樣品的制備方法,例如作為使用李Zhaogun,可以縮短檢測(cè)時(shí)間,可以在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行.

實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是近年來廣泛應(yīng)用于沙門氏菌快速檢測(cè)的一種方法.采用TaqManPCR擴(kuò)增沙門氏菌D型菌株特有的sefA基因,使用該方法與常規(guī)培養(yǎng)法對(duì)經(jīng)過同質(zhì)加工處理的雞蛋樣本進(jìn)行檢測(cè),其結(jié)果與常規(guī)培養(yǎng)法獲得的結(jié)果100%一致.但是該方法只需要2天,而常規(guī)方法需要5天,而且在雞蛋樣本中的靈敏度為1CFU/600g,大大提高了低樣本量檢測(cè)效率.國(guó)內(nèi),李光偉等建立了快速、敏感、特異以及準(zhǔn)確定量檢測(cè)沙門氏菌的FQ.PCR方法.采用沙門氏菌高度保守序列fimY,設(shè)計(jì)特異性引物和探針,通過對(duì)反應(yīng)體系和條件的優(yōu)化,然后進(jìn)行特異性和適用性實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明用FQ.PCR方法和國(guó)標(biāo)法檢出的陽性樣本數(shù)和檢出率基本一致,準(zhǔn)確率達(dá)99.17%.該FQ.PCR檢測(cè)試劑可應(yīng)用于食品衛(wèi)生監(jiān)管、商品檢驗(yàn)檢疫以及臨床診斷等領(lǐng)域.建立的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法耗時(shí)約2h,是一種快速的檢測(cè)方法.通過檢測(cè)患者肛拭子標(biāo)本,發(fā)現(xiàn)該方法對(duì)沒有經(jīng)過增菌的標(biāo)本檢測(cè)效率和經(jīng)過增菌的檢測(cè)效率完全一致,而且靈敏度較高,在減少標(biāo)本增菌時(shí)能明顯提高檢測(cè)陽性率.這一方法可以大大縮短報(bào)告結(jié)果的時(shí)間,快速鑒定突發(fā)性食物中毒事件中的病原體.基于inv基因簇設(shè)計(jì)的引物具屬特異性,可用于鑒別沙門菌,盡管與極少數(shù)沙門菌菌株缺少invA基因的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有矛盾,但通過檢查invA基因來確定沙門菌的存在已經(jīng)成為共識(shí).

結(jié)束語

食品安全不僅關(guān)系到人們的生命健康,而且關(guān)系到社會(huì)的穩(wěn)定和諧.隨著社會(huì)飲食安全問題的頻繁出現(xiàn),食品安全成為了人們的重要關(guān)注點(diǎn).國(guó)家也進(jìn)一步加強(qiáng)了對(duì)食品市場(chǎng)的整治力度,以提高食品安全,從而為人們提供一個(gè)安全的生活環(huán)境.雖然目前用于檢測(cè)沙門氏菌的方法都有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),但隨著科技的發(fā)展,人們探索,繼續(xù)進(jìn)行實(shí)踐,我們可以預(yù)期,將會(huì)有更多,更高的敏感性,特異性,診斷的新方法較短.

沙門氏菌、志賀氏菌的檢測(cè)

10302 四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液基礎(chǔ) Tetrathionate Broth Base 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性增菌，每100ml培養(yǎng)基中添加 1支20315和1 支 20316a

10303 亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液 Selenite Cystine Broth 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性增菌

10304 亞硫酸鉍（BS）瓊脂 Bismuth Sulfite Agar 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性分離

10305 HE 瓊脂 Hektoen Enteric Agar 250g/瓶用于腸道致病菌的選擇性分離

10306 木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂 Xylose Lysine Desoxycholate Agar 250g/瓶用于腸道致病菌的選擇性分離

10313 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基（DHL） Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Medium 250g/瓶用于腸道致病菌的選擇性分離

10319 氯化鎂孔雀綠（RV）增菌液 Rappaport-Vassiliadis Medium 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性增菌

10320 亞利桑那菌瓊脂（SA） Salmonella Arizona Agar 250g/瓶用于亞利桑那菌的分離

10321 WS 瓊脂 WS Agar 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性分離

10322 RVS 肉湯 Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性增菌

10323 亮綠酚紅瓊脂 Brilliant Green/Phenol Red Lactose Agar 250g/瓶用于沙門氏菌選擇性分離（GB、ISO、SN）