菌種活化的操作方法
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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菌種活化的操作方法
低溫保存管中之一般菌種臨時(shí)存放及活化
A. 低溫保存管之臨時(shí)存放及解凍中之一般菌種臨時(shí)存放及活化
步驟一：低溫保存管(cryo tube)應(yīng)存放于－20 ~ －80之低溫條件下.
步驟二：準(zhǔn)備 37之 70﹪(V/V)酒精浴槽(只能在電氣水浴槽中改放酒精,不可以火加溫,以免危險(xiǎn);若以 37水浴取代,應(yīng)避免水中微生物污染),其中事先安放小試管架(可放置 cryo tube 之大小),液面不可高達(dá)管塞.
步驟三：將 cryo tube 從低溫保存條件中取出,置于 37浴槽之小試管架上.
步驟四：不斷輕微搖動(dòng) cryo tube,液面不可高至管塞,直至結(jié)冰完全溶解(約需 2 分鐘).
B. 菌株活化: 在無菌操作下
步驟一：用無菌微量吸管,從已溶解之cryo tube 吸取 1-2滴之菌液,滴入固態(tài)指定培養(yǎng)基(培養(yǎng)基編號(hào)及溫度示于菌株訂購(gòu)單)某一邊緣附近,以劃線法接種于培養(yǎng)基.
步驟二：將接種好的培養(yǎng)基置于指定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng).
C. 劃線法
步驟一：手持金屬接種環(huán),用酒精燈將接種環(huán)(共約5公分)燒至火紅,并不斷來回?zé)窘饘俟潭U之前約10公分,等待約10秒鐘,將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠(無菌體部份),待接種環(huán)完全冷卻后,以環(huán)沾黏菌滴,由培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線,直到涵蓋1/3培養(yǎng)基為止(I區(qū)).
步驟二：灼燒接種環(huán),待數(shù)秒冷卻后,旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自I區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域(II區(qū)).
步驟三：重復(fù)2的動(dòng)作完成III 區(qū)與IV 區(qū).
步驟四：灼燒接種環(huán),將接種環(huán)歸位.