實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面微生物的檢查方法

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

作者：

國內(nèi)的產(chǎn)量大的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面微生物的檢查方法

因?yàn)槲⑸锸侨庋劭床灰姷?所以初學(xué)微生物學(xué)的學(xué)生常不知道外界環(huán)境和所有與外界接觸的身體各部位均有微生物的存在.實(shí)際上它們廣泛分布于室內(nèi)外的空氣,水和土壤中,桌,椅和板凳的表面,衣服以及身體的皮膚,粘膜(例如鼻腔,口腔,喉頭等的粘膜)等處,因此,可以說微生物是無縫不鉆,無孔不入的.在學(xué)生第一次進(jìn)入微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室時(shí),建立起“微生物無所不在”這一概念是特別重要的,因?yàn)檫@樣才能體會(huì)到無菌技術(shù)和環(huán)境衛(wèi)生的必要性,才能防止外界微生物對(duì)培養(yǎng)物的污染,才能防止病原性細(xì)菌或病毒通過手或衣服進(jìn)入人體而引起傳染.

從周圍環(huán)境和體表各部取樣生長出來的微生物,雖然大多數(shù)屬正常菌群,但當(dāng)進(jìn)入破損的皮膚或傳入口內(nèi)或眼睛等處也會(huì)引起傳染,這一方面是因?yàn)橥ㄟ^培養(yǎng),微生物的量大；另一方面,有些微生物在一定的部位是非致病菌,但當(dāng)條件改變時(shí)也可能致病(稱為條件致病菌),因此必須詳細(xì)閱讀操作步驟和聽從指導(dǎo)者的說明,特別是用過的棉簽和工作完畢后的培養(yǎng)物等均要放在指定的容器內(nèi),接種環(huán)不僅在用前必須燒灼滅菌,而且用后也應(yīng)立即燒灼.這是整個(gè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程和今后進(jìn)行微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)均需注意的.

下面的實(shí)驗(yàn)就是從實(shí)驗(yàn)室空氣,實(shí)驗(yàn)臺(tái),門的旋扭(或把手)和人的頭發(fā),皮膚,洗手前后的手指和鼻腔粘膜等處取樣,接種于瓊脂平板上,經(jīng)培養(yǎng)1至2天后,觀察并比較不同來源的微生物生長的數(shù)量和類型.

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面微生物的檢查

一,目的要求

1.證明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與體表存在微生物.

2.比較來自不同場所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型.

3.體會(huì)無菌操作的重要性.

二,基本原理

平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分,當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上,在37攝氏度溫度下培養(yǎng),1至2天內(nèi)每一菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖,形成一個(gè)可見的細(xì)胞群體的集落,稱為菌落.每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn),例如菌落的大小,表面干燥或濕潤,隆起或扁平,粗糙或光滑,邊緣整齊或不整齊,菌落透明或半透明或不透明,顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等.因此,可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型.

三,器材

肉膏蛋白胨瓊脂平板,無菌水,滅菌棉簽(裝在試管內(nèi)),接種環(huán),試管架,酒精燈或煤氣燈,記號(hào)筆(或蠟筆),廢物缸.

四,操作步驟

每組在“實(shí)驗(yàn)室”和“人體”兩大部分中各選擇一個(gè)內(nèi)容做實(shí)驗(yàn),或由教師指定分配,最后結(jié)果供全班討論.

1.寫標(biāo)簽

任何一個(gè)實(shí)驗(yàn),在動(dòng)手操作前均需首先將器皿用記號(hào)筆做上記號(hào),培養(yǎng)皿的記號(hào)一般寫在皿底上.如果寫在皿蓋上,同時(shí)觀察兩個(gè)以上培養(yǎng)皿的結(jié)果,打開皿蓋時(shí),容易混淆.用記號(hào)筆寫上班級(jí),姓名,日期,本次實(shí)驗(yàn)還要寫上樣品來源(如實(shí)驗(yàn)室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等),字盡量小些,寫在皿底的一邊,不要寫在當(dāng)中,以免影響觀察結(jié)果.

2.實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌檢查

(1)空氣將一個(gè)肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當(dāng)時(shí)做實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室,移去皿蓋,使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中；將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人走動(dòng)的其他實(shí)驗(yàn)室,移去皿蓋.一小時(shí)后蓋上兩個(gè)皿蓋.

(2)實(shí)驗(yàn)臺(tái)和門的旋鈕

(a)用記號(hào)筆在皿底外面中央畫一直線,再在此線中間處畫一垂直線.

(b)取棉簽左手拿含有棉簽的試管,在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指,無名指夾持棉塞(或試管帽),將其取出,將管口很快地通過煤氣燈(或酒精燈)的火焰,燒灼管口；輕輕地傾斜試管,用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出.放回棉塞(或試管帽),并將空試管放在試管架上.

(c)弄濕棉簽左手取滅菌水試管,如上法拔出棉塞(或試管帽)并燒灼管口,將棉簽插入水中,再提出水面,在管壁上擠壓一下以除去過多的水分,小心將棉簽取出,燒灼管口,放回棉塞(或試管帽),并將滅菌水試管放在試管架上.

(d)取樣將濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的范圍.

(e)接種在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫.再將棉簽伸入,在瓊脂表面頂端接種(滾動(dòng)一下),立即閉合皿蓋.將原放棉簽的空試管拔出棉塞(或試管帽),燒灼管口,插入用過的棉簽,將試管放回試管架.

(f)劃線另取接種環(huán)在火焰上滅菌,先將環(huán)端燒熱,然后將接種環(huán)提起垂直放在火焰上,以使火焰接觸金屬絲的范圍廣一些,待接種環(huán)燒紅,再將接種環(huán)斜放,沿環(huán)向上,燒至可能碰到培養(yǎng)皿的部分,再移向環(huán)端,如此很快地來回通過火焰數(shù)次.

左手拿起平板,同樣開啟一縫,將滅過菌并冷卻了的接種環(huán)(可在瓊脂表面邊緣空白處試溫度,若發(fā)出濺潑聲,表示太燙),通過瓊脂頂端的接種區(qū),向下劃線,直到平板的一半處.注意：接種環(huán)與瓊脂表面的角度要小,移動(dòng)的壓力不能太大,否則會(huì)刺破瓊脂.

閉合皿蓋,左手將平板向左轉(zhuǎn)動(dòng)至空白處,右手拿的接種環(huán)再在火焰上燒灼,使冷.接種環(huán)通過前面劃的線條再在瓊脂的另一半,D從上向下來回劃線至1/2處.

燒灼接種環(huán),轉(zhuǎn)動(dòng)平板,劃最后1/4,立刻蓋上皿蓋,燒灼接種環(huán),放回原處.

整個(gè)劃線操作均要求無菌操作,即靠近火焰,而且動(dòng)作要快.

3.人體細(xì)菌的檢查

(1)手指(洗手前與洗手后)

(a)分別在兩個(gè)瓊脂平板上標(biāo)明洗手前與洗手后(當(dāng)然,班級(jí),姓名,日期各項(xiàng)在每次寫標(biāo)簽時(shí)是必不可少的).

(b)移去皿蓋,將未洗過的手指在瓊脂平板的表面,輕輕地來回劃線,蓋上皿蓋.

(c)用肥皂和刷子,用力刷手,在流水中沖洗干凈,干燥后,在另一瓊脂平板表面來回移動(dòng),蓋上皿蓋.

(2)頭發(fā) 在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方,用手將頭發(fā)用力搖動(dòng)數(shù)次,使細(xì)菌降落到瓊脂平板表面,然后蓋上皿蓋.

(3)咳嗽將去蓋瓊脂平板放在離口約6至8厘米處,對(duì)著瓊脂表面用力咳嗽,然后蓋上皿蓋.

(4)鼻腔