沙門氏菌檢驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng):血清學(xué)試驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
山東培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家
沙門氏菌檢驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng):血清學(xué)試驗(yàn)
血清學(xué)作為鑒定的一部分,必須完成.
實(shí)驗(yàn)室必須配備沙門氏菌的多價(jià)菌體(Ｏ)和多價(jià)鞭毛(Ｈ)診斷血清.
其中血清學(xué)分型為選作試驗(yàn)項(xiàng)目.
血清學(xué)試驗(yàn)必須基于生化試驗(yàn)的結(jié)果,不能單純以血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)報(bào)告最終結(jié)果.
檢查培養(yǎng)物有無(wú)自凝性
一般采用1.2%~1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原.首先排除自凝集反應(yīng),在潔凈的玻片上滴加一滴生理鹽水,將待試培養(yǎng)物混合于生理鹽水滴內(nèi),使成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動(dòng)30s~60s,在黑色背景下觀察反應(yīng)(必要時(shí)用放大鏡觀察),若出現(xiàn)可見的菌體凝集,即認(rèn)為有自凝性,反之無(wú)自凝性.對(duì)無(wú)自凝的培養(yǎng)物參照下面方法進(jìn)行血清學(xué)鑒定.
多價(jià)菌體抗原O鑒定
在玻片上劃出2個(gè)約1cm×2cm的區(qū)域,挑取1環(huán)待測(cè)菌,各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部,在其中一個(gè)區(qū)域下部加1滴多價(jià)菌體(O)抗血清,在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水,作為對(duì)照.
再用無(wú)菌的接種環(huán)或針?lè)謩e將兩個(gè)區(qū)域內(nèi)的菌苔研成乳狀液.將玻片傾斜搖動(dòng)混合1min,并對(duì)著黑暗背景進(jìn)行觀察,任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽(yáng)性反應(yīng).
O血清不凝集時(shí),將菌株接種在瓊脂量較高的(如2%~3%)培養(yǎng)基上再檢查;如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應(yīng)時(shí),可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液,于酒精燈火焰上煮沸后再檢查.
多價(jià)鞭毛抗原H鑒定
操作同多價(jià)菌體抗原O鑒定.H抗原發(fā)育不良時(shí),將菌株接種在0.55%~0.65%半固體瓊脂平板的中央,待菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí),在其邊緣部分取菌檢查;或?qū)⒕晖ㄟ^(guò)接種裝有0.3%~0.4%半固體瓊脂的小玻管1次~2次,自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查.
綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果,報(bào)告25g或25mL樣品中檢出或未檢出沙門氏菌.