乳酶生的鑒別
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
乳酶生的鑒別
1)牛奶凝固力取本品0.3克,加至20毫升牛奶培
養(yǎng)基(取新鮮牛奶或市售純牛奶,分裝至100毫升離心管,于4至8T:,以每分鐘5000轉(zhuǎn)離心5至10分鐘,去除上層脂肪層;或取新鮮牛奶置沸水浴中煮30分鐘,于2-10攝氏度放置18小時以上,使乳脂析出,取脫脂溶液.將制備好的脫脂牛奶分裝于試管中,每管20mU于1151濕熱滅菌20分鐘.或取脫脂奶粉,制成10%至15%的溶液,分裝,于115攝氏度濕熱滅菌20分鐘)中,搖勻,作為供試品管,取2管平行試驗;另取牛奶培養(yǎng)基20毫升作為對照管,在37t:培養(yǎng)48小時(必要時延長至72小時).對照管牛奶應(yīng)無凝固現(xiàn)象,供試品管牛奶應(yīng)凝固.
運動性檢査:自含量測定項下計數(shù)平皿中,選取具有透明圈的不同形態(tài)菌落各2個,分別接種于含量測定項下的含糖牛肉湯培養(yǎng)基中,置37攝氏度培養(yǎng)24小時,取培養(yǎng)物,以懸滴法觀察.應(yīng)無運動性.
酸度:取鑒別(3)項下含糖牛肉湯培養(yǎng)物適量,接種于鑒別(1)項下牛奶培養(yǎng)基20毫升中,作為供試品管;另取牛奶培養(yǎng)基20毫升,作為對照管.分別置37X:培養(yǎng)48小時,取供試品管和對照管培養(yǎng)物各5毫升,分別加水20毫升和酚酞指示液3滴,用氫氧化鈉滴定液(0.lmol/U滴定至溶液顯淡紅色,并保持1分鐘不褪.兩者消耗氫氧化鈉滴定液(0.lmol/L)毫升數(shù)的差值,應(yīng)不小于2毫升.
雜藺取本品,照微生態(tài)活菌制品總論項下的方法檢査(中國藥典三部),非致病性雜菌數(shù)測定采用磷酸鹽緩沖液營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基[每1000毫升營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(胨10.0克,氣化鈉5.0克,牛肉浸出粉3.0克,瓊脂14.0克,水1000毫升,取上述成分混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH為弱堿性,煮沸,濾清,調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2士0.2)中,加人磷酸二氫鉀3.56克、磷酸氫二鈉7.23克,溶解,混勻,分裝,121攝氏度濕熱滅菌20分鐘].除屎腸球菌外,l克供試品中含非致病菌性雜菌數(shù)不得過500攝氏度fu,含真菌數(shù)不得過100du,不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌和志賀菌.
含最測定:培養(yǎng)基制備方法培養(yǎng)基可按以下處方制備,也可以使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的商品化培養(yǎng)基.配制后,應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌.
1.含糖牛肉湯培養(yǎng)基
牛肉膏3克
氣化鈉5克
胨10克
乳糖20克
水1000毫升
取上述成分,混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為6.0,115*€濕熱滅菌20分鐘.
2.1%碳酸鈣含糖牛肉瓊脂培養(yǎng)基按上述含糖牛肉湯培養(yǎng)基的處方和制法,加人溴甲酚紫0.06克、碳酸鈣10克、瓊脂15至20克,加熱溶解,混勻,分裝,115攝氏度濕熱滅菌20分鐘.
測定法接種與培養(yǎng)無菌稱取本品10克,加無菌的0.9%氯化鈉溶液至100毫升,加適量無菌玻璃珠,搖勻,制成1:10的混懸液,取上述混懸液,用無菌的0.9%氣化鈉溶液梯度稀釋.取3個連續(xù)適宜稀釋度的混懸液l毫升,置無菌平皿中,每個稀釋級至少2個平皿中,注人15至20毫升溫度不超過45攝氏度的1%碳酸鈣含糖牛肉瓊脂培養(yǎng)基,混勻,凝固,倒置,于37攝氏度培養(yǎng)48小時,觀察結(jié)果.有透明圈的菌落為乳酸菌.
菌落計數(shù)選取平均菌落數(shù)為10至300攝氏度hi的稀釋級,作為菌落報告的依據(jù).以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告每l克樣品所含的活乳酸菌數(shù)(取兩位有效數(shù)字,若兩個平皿的菌落數(shù)相差1倍以上,需重新試驗).