微生物的常規(guī)鑒定實(shí)驗(yàn)方法
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
微生物的常規(guī)鑒定
一、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察
1、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察
微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過(guò)染色,在顯微鏡下對(duì)其形狀、大小、排列方式、細(xì)胞結(jié)構(gòu)(包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性進(jìn)行觀察,直觀地了解細(xì)菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性,根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達(dá)到區(qū)別、鑒定微生物的目的.
2、微生物培養(yǎng)特性觀察
革蘭染色法,丹麥病理學(xué)家C.Gram 1884年創(chuàng)立(1)涂片 (2)晾干 (3)固定 (4)結(jié)晶紫色染色;1min.水洗 (5)媒染;滴加盧哥氏碘液,媒染1min.水洗(6) 脫色;將玻片傾斜,連續(xù)滴加95%乙醇脫色20至25s至流出液無(wú)色,立即水洗.(7) 復(fù)染;滴加蕃紅復(fù)染5min.水洗(8) 晾干;晾干或者用吸水紙吸干. (9) 鏡檢;先用低倍,再用高倍,最后用油鏡.(10)實(shí)驗(yàn)完畢后的處理;浸過(guò)油的鏡頭;a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去.b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2至3次.c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2至3次.注意擦鏡頭時(shí)向一個(gè)方向擦拭.細(xì)菌染色玻片用廢擦鏡紙將香柏油擦干.
微生物培養(yǎng)特性的觀察是微生物檢驗(yàn)鑒別中的一項(xiàng)重要內(nèi)容.
1)細(xì)菌的培養(yǎng)特征 包括以下內(nèi)容;在固體培養(yǎng)基上,觀察菌落大小、形態(tài)、顏色(色素是水溶性還是脂溶性)、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等.在液體培養(yǎng)中的表面生長(zhǎng)情況(菌膜、環(huán))混濁度及沉淀等.半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運(yùn)動(dòng)、擴(kuò)散情況.
2)霉菌酵母菌的培養(yǎng)特征;大多數(shù)酵母菌沒(méi)有絲狀體,在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細(xì)菌的很相似,只是比細(xì)菌菌落大且厚.液體培養(yǎng)也和細(xì)菌相似,有均勻生長(zhǎng)、沉淀或在液面形成菌膜.
霉菌有分支的絲狀體,菌絲粗長(zhǎng),在條件適宜的培養(yǎng)基里,菌絲無(wú)限伸長(zhǎng)沿培養(yǎng)基表面蔓延.霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲都常帶有不同顏色,因而菌落邊緣和中心,正面和背面顏色常常不同,如青霉菌;孢子青綠色,氣生菌絲無(wú)色,基內(nèi)菌絲褐色.霉菌在固體培養(yǎng)表面形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落.
二、生理生化試驗(yàn)
微生物生化反應(yīng);指用化學(xué)反應(yīng)來(lái)測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物,生化反應(yīng)常用來(lái)鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物.因此微生物生化反應(yīng)是微生物分類鑒定中的重要依據(jù)之一.
微生物檢驗(yàn)中常用的生化反應(yīng)有;
糖或醇類發(fā)酵試驗(yàn) 淀粉水解試驗(yàn) V-P試驗(yàn) 甲基紅(MR)試驗(yàn) 靛基質(zhì)(Indole)試驗(yàn)
過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 硝酸鹽還原試驗(yàn) 明膠液化試驗(yàn) 尿素酶(Urease)試驗(yàn) 氧化酶試驗(yàn)
硫化氫(H2S)試驗(yàn) 三糖鐵(TSI)瓊脂試驗(yàn) 氨基酸脫羧酶的測(cè)定 耐鹽性試驗(yàn) 卵磷脂酶的測(cè)定
石蕊牛奶反應(yīng) 酪蛋白水解 苯丙氨酸脫氨試驗(yàn) 氰化鉀試驗(yàn) 對(duì)疊氮化鈉的抗性
硫化氫-靛基質(zhì)-動(dòng)力(SIM)瓊脂試驗(yàn) 含碳化合物的利用(檸檬酸鹽或丙酸鹽利用)
三、血清學(xué)試驗(yàn)
血清學(xué)反應(yīng)是指;相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用,可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀、凝集現(xiàn)象.在食品微生物檢驗(yàn)中,常用血清學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒定分離到的細(xì)菌,以最終確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果.
在細(xì)菌的檢測(cè)中,應(yīng)用最多的是凝集試驗(yàn)、沉淀反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn).
血清學(xué)試驗(yàn)的一般特點(diǎn);
1)抗原體的結(jié)合具有特異性,當(dāng)有共同抗原體存在時(shí),會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng).2)抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合,這種結(jié)合雖相當(dāng)穩(wěn)定,但是可逆的.3)抗原體的結(jié)合是按一定比例進(jìn)行的,只有比例適當(dāng)時(shí),才能出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng).4)血清學(xué)反應(yīng)大體分為兩個(gè)階段進(jìn)行,但其間無(wú)嚴(yán)格界限.第一階段為抗原體特異性結(jié)合階段,反應(yīng)速度很快,只需幾秒至幾分鐘反應(yīng)即可完畢,但不出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)現(xiàn)象.第二階段為抗原體反應(yīng)的可見(jiàn)階段,表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)等.反應(yīng)速度慢,需幾分、幾十分以至更長(zhǎng)時(shí)間.而且,在第二階段反應(yīng)中,電解質(zhì)、PH、溫度等環(huán)境因素的變化,都直接影響血清學(xué)反應(yīng)的結(jié)果.
1、凝集反應(yīng)(Agglutination reaction)
顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體結(jié)合,在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象,稱為凝集反應(yīng).其中的抗原稱為凝集原,抗體稱為凝集素.在該反應(yīng)中,因?yàn)閱挝惑w積抗體量大,做定量實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)稀釋抗體.
1)直接凝集反應(yīng);a. 玻片凝集法;b. 試管凝集法 2)間接凝集反應(yīng)
2、沉淀反應(yīng)(Precipitation test)
可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合,在有適量電解質(zhì)存在下,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間,形成肉眼可見(jiàn)的沉淀物,稱為沉淀反應(yīng).反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原,抗體為沉淀素.由于在單位體積內(nèi)抗原量大,為了不使抗原過(guò)剩,故應(yīng)稀釋抗原,并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價(jià).
1)環(huán)狀沉淀反應(yīng) 2)絮狀沉淀反應(yīng)3)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)
3、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)(Complement fixation reaction)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是在補(bǔ)體參與下,以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng).補(bǔ)體無(wú)特異性,能與任何一組抗原抗體復(fù)合物結(jié)合而引起反應(yīng).如果補(bǔ)體與綿羊紅細(xì)胞、溶血素的復(fù)合物結(jié)合,就會(huì)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象; 如果與細(xì)菌及相應(yīng)抗體復(fù)合物結(jié)合,就會(huì)出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象.因此,如果出現(xiàn)溶菌,說(shuō)明抗原抗體是相對(duì)應(yīng)的(試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性);如果出現(xiàn)溶血,說(shuō)明抗原抗體不相對(duì)應(yīng)(陰性).
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