麥芽低聚糖微生物生長的實驗研究及應(yīng)用
發(fā)布時間：
2022-12-27
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摘要目的：研究麥芽低聚糖是否可作為蔗糖的代用品用于糖漿劑。方法：培養(yǎng)基靈敏度檢查法，分別用麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖作碳源，代替需氣茵、厭氣茵、霉菌培養(yǎng)基中的葡萄糖配制培養(yǎng)基，按比濁法制備不同數(shù)量級的試驗茵，接種到各培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，以觀察各試驗茵在不同碳源培養(yǎng)基中的生長差異。結(jié)論：麥芽低聚糖與蔗糖較之葡萄糖在培養(yǎng)基中不易被藤黃微球菌、生孢梭茵、白色念珠菌所利用，麥芽低聚糖與蔗糖相似。
關(guān)鍵詞麥芽低聚糖蔗糖、葡萄糖培養(yǎng)基靈敏度檢查法
麥芽低聚糖通常是2～10個單糖以糖苷鍵結(jié)合的混合物，是淀粉糖中一種具有保健功能的新糖源。由于麥芽低聚糖具有易消化吸收、甜味溫和、口感好、食后不易發(fā)生齲齒等優(yōu)點剖，已成為理想的食品添加劑，在國內(nèi)外廣泛應(yīng)用。它是否可作為蔗糖的代用品，其很重要的一點取決于麥芽低聚糖本身被微生物利用的情況，為此設(shè)計了如下微生物生長的實驗。
1儀器與材料
1．1儀器：pHs一3c型酸度計(上海雷磁儀器廠)，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進醫(yī)療器械廠)，79D3型霉菌培養(yǎng)隔水式恒溫箱(鎮(zhèn)江地區(qū)醫(yī)療器械廠)，JCZ一Ⅲ凈化工作臺(蘇州長橋凈化設(shè)備廠)，H—1微型混合器(上海青浦徐新生化儀器廠。
1．2材料：酪胨(胰酶水解)(北京)，蛋白胨、酵母浸出粉(上海試劑供應(yīng)研究中心)，1一胱氨酸、硫乙醇酸鈉(上海衛(wèi)輝化學(xué)試劑廠)，硫酸鎂、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖、蔗糖(A．R)，瓊脂(上海試劑二廠)，麥芽低聚糖(揚州五一集團藥用輔料廠，批號970411)，藤黃微球菌(28001)、生孢梭菌(64941)、白色念珠菌(98001)(揚州市藥品檢驗所)，菌液均按《中國藥典M995版二部附錄制備。
1．3其它：中國細菌濁度標準(中國藥品生物制品檢定所，批號97一1，失效期98．6)，需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基、霉菌培養(yǎng)基按中國藥典1995版二部附錄配制。
2方法
培養(yǎng)基靈敏度檢查法。分別用麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖作碳源，代替需氣菌厭氣菌、霉菌培養(yǎng)基中的葡萄糖配制培養(yǎng)基，用比濁法制備不同數(shù)量級的試驗菌，分別接種到各培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，以觀察各試驗菌在不同碳源培養(yǎng)基中的生長差異。全部實驗于1997年10月～1998年2月在本院藥檢室進行，實驗均在凈化臺開啟30rain后操作(菌落數(shù)平均小于1個)；所用器皿以180℃干熱滅菌2h；培養(yǎng)基配制滅菌后經(jīng)30～35℃、24h培養(yǎng)，證實無菌生長，方可使用；菌液稀釋時在渦輪式混合器上混合時間大于2rain。
2．1已知濃度試驗菌的制備：分別取藤黃微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌的濃菌液各0.1～0.2ML，用滅菌0.9oA氯化鈉溶液稀釋后．放入三支空比濁管中與細菌濁度標準管比較成相同濁度，查參考菌數(shù)表，其標準菌液含菌量分別為2500萬／ML、1億／ML、450萬／ML。為了便于計算，將底數(shù)調(diào)整為10的倍數(shù)，依次取標準菌液
2ML、1ML、2ML，分別加滅菌氯化鈉溶液3ML、9ML、7ML，混勻，即得藤黃微球菌1：10相當于1000萬／ML，生孢梭菌1：10相當于1000萬／ML，白色念珠菌1：10相當于100萬／ML，然后依次作10倍稀釋并平板計數(shù)，以復(fù)核試驗菌的含菌量。
2．2接種與培養(yǎng)：將稀釋后含有不同數(shù)量級的藤黃微球菌1：10～10、生孢梭菌1：10～10、白色念珠菌1：10?！?0各1ML．分別接種至9ML含麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖的需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基、霉菌培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種3管，以未接種的培養(yǎng)基作對照，細菌試驗管置30～35℃培養(yǎng)3天，霉菌試驗管置2O～
25℃培養(yǎng)5天，觀察各試驗菌在含不同碳源的培養(yǎng)基中的生長差異。以接種培養(yǎng)基管數(shù)的2／3以上呈現(xiàn)的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度(且接種菌數(shù)應(yīng)小于10個)，三次試驗中以兩次達到的最高靈敏度為判定標準。
表1各試驗菌在含不同碳源的培養(yǎng)基中生長情況表(n一6)
4結(jié)論
含葡萄糖的需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基靈敏度為藤黃微球菌1：10、生孢梭菌1：10，霉菌培養(yǎng)基靈敏度為白色念珠菌1：10.均符合藥典規(guī)定；而含麥芽低聚糖、蔗糖的需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基、霉菌培養(yǎng)基靈敏度均不符合規(guī)定。由此可知，麥芽低聚糖與蔗糖較之葡萄糖不易被微生物生長利用。
5討論
5．1糖類是微生物生長最常利用的碳源，麥芽低聚糖、蔗糖它們的分子量均較大，不能直接進入細菌細胞，必須被細菌胞外酶水解為單糖(葡萄糖或果糖)，才能被微生物生長所利用，而自然界中大多數(shù)細菌都能利用葡萄糖。
5．2選擇培養(yǎng)基靈敏度檢查法作本實驗方法，目的是通過量化實驗條件，即加入的微生物可計數(shù)，使結(jié)果重現(xiàn)性好．有說服力；選擇藤黃微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌作微生物生長實驗，使結(jié)果具有代表性；培養(yǎng)基除碳源外，在其它條件完全一致的情況下比較麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖三種碳源被微生物生長利用的難易程度，使結(jié)果更加可靠。
5．2．1為確保結(jié)果可靠．重現(xiàn)性好，避免生物差異尤其重要，要求每次所用試驗菌種的培養(yǎng)溫度和時間相同，稀釋后的菌液與標準管比較濁度一致。
5．2．2液體培養(yǎng)基可因溶解氧而不利于厭氧菌生長，培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進行還原處理(煮沸驅(qū)氧)；厭氧培養(yǎng)時沿液面緩緩加入菌液，避免用力振搖，以免過多的氧溶解于培養(yǎng)基中。固體培養(yǎng)基可因在大氣中放置而被氧化，培養(yǎng)基表面Eh上升，對厭氧菌生長不利。生孢梭菌在瓊脂平板上不易形成菌落，只形成凹形，本實驗平板計數(shù)以凹形計數(shù)，供參考。
南京鐵道醫(yī)學(xué)院附屬揚州市第一人民醫(yī)院