微生物學(xué)實驗技術(shù):水中細菌學(xué)檢查
發(fā)布時間：
2022-11-16
作者：
微生物學(xué)實驗技術(shù):水中細菌學(xué)檢查
I 水中細菌總數(shù)的測定
一,目的要求
l.學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細菌總數(shù)測定的方法.
2.了解水源水的平板菌落計數(shù)的原則.
二,基本原理
本實驗應(yīng)用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定水中細菌總數(shù).由于水中細菌種類繁多,它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大,不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下,使水中所有的細菌均能生長繁殖,因此,以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落,計算出來的水中細菌總數(shù)僅是一種近似值.目前一般是采用普通肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基.
三,器材
l.培養(yǎng)基 肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,無菌水.
2.儀器或其他用具 滅菌三角燒瓶,滅菌的帶玻璃塞瓶,滅菌培養(yǎng)皿,滅菌吸管,滅菌試管等.
四,操作步驟
l.水樣的采取
(1)自來水 先將自來水龍頭用火焰燒灼3分鐘滅菌,再開放水龍頭使水流5分鐘后,以滅菌三角燒瓶接取水樣,以待分析.
(2)池水,河水或湖水 應(yīng)取距水面l0～15cm的深層水樣,先將滅菌的帶玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻轉(zhuǎn)過來,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛滿后,將瓶塞蓋好,再從水中取出,最好立即檢查,否則需放入冰箱中保存.
2.細菌總數(shù)測定
(1)自來水
1用滅菌吸管吸取l毫升水樣,注入滅菌培養(yǎng)皿中.共做兩個平皿.
2分別傾注約15毫升己溶化并冷卻到45攝氏度左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,并立即在桌上作平面旋搖,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻.
3另取一空的滅菌培養(yǎng)皿,傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15毫升作空自對照.
4培養(yǎng)基凝固后,倒置于37攝氏度 溫箱中,培養(yǎng)24h,進行菌落計數(shù).
5兩個平板的平均菌落數(shù)即為l毫升水樣的細菌總數(shù).
(2)池水,河水或湖水等
1稀釋水樣 取3個滅菌空試管,分別加入9毫升滅菌水.取l毫升水樣注入第一管9毫升滅菌水內(nèi),搖勻,再自第一管取1毫升至下一管滅菌水內(nèi),如此稀釋到第三管,稀釋度分別為10-1,10-2與10-3.稀釋倍數(shù)看水樣污濁程度而定,以培養(yǎng)后平板的菌落數(shù)在30～300個之間的稀釋度最為合適,若三個稀釋度的菌數(shù)均多到無法計數(shù)或少到無法計數(shù),則需繼續(xù)稀釋或減小稀釋倍數(shù).
一般中等污穢水樣,取10-1,10-2,10-3三個連續(xù)稀釋度,污穢嚴(yán)重的取10-2,10-3 ,10-4三個連續(xù)稀釋度.
2自最后三個稀釋度的試管中各取l毫升稀釋水加入空的滅菌培養(yǎng)皿中,每一稀釋度做兩個培養(yǎng)皿.
3各傾注15毫升已溶化并冷卻至45攝氏度左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,立即放在桌上搖勻.
4凝固后倒置于37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h.
3.菌落計數(shù)方法
(1)先計算相同稀釋度的平均菌落數(shù).若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時,則不應(yīng)采用,而應(yīng)以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù).若片狀菌苔的大小不到平板的一半,而其余的一半菌落分布又很均勻時,則可將此一半的菌落數(shù)乘2以代表全平板的菌落數(shù),然后再計算該稀釋度的平均菌落數(shù).
(2)首先選擇平均菌落數(shù)在30~300之間的,當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時,則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細菌總數(shù)(見表26-1,例1).
(3)若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)均在30～300之間,則按兩者菌落總數(shù)之比值來決定.若其比值小于2,應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于2,則取其中較小的菌落總數(shù)(見表26-l,例2及例3).
(4)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)(見表26-l,例4).
(5)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)(見表26-l,例5).
(6)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間,則以最近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)(見表26-1,例6).
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