常見蛋白酶抑制劑

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-24

作者：

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在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，蛋白水解酶就會(huì)被釋放出來或被激活，影響最終的結(jié)果。為了避免這些情況的出現(xiàn)，可以在樣品制備時(shí)盡可能低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在pH9以上就失活了，因此Tris-base，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時(shí)，我們可以通過加入各種蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)的降解。

根據(jù)催化中心結(jié)構(gòu)的不同蛋白酶可分為以下4類：

1、絲氨酸蛋白酶

在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸，如糜蛋白酶、彈性蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、凝血酶、枯草桿菌蛋白酶、胰酶等。

2、半胱氨酸蛋白酶（又稱硫醇或SH蛋白酶）

在其催化中心含有半胱氨酸，如鈣蛋白酶、組織蛋白酶B/C/L、木瓜蛋白酶等。

3、天（門）冬氨酸蛋白酶（羧基蛋白酶）

在其活性中心含有天（門）冬氨酸，如組織蛋白酶D、木瓜蛋白酶、腎素等。

4、金屬蛋白酶

在其催化中心含有金屬離子，如氨基肽酶、羧基蛋白酶A/B、嗜熱菌蛋白酶等。

除了蛋白酶抑制劑以外，在許多研究過程中，尤其是一些制藥公司和研究院所在研究藥理學(xué)機(jī)理的時(shí)候，需要了解蛋白磷酸化途徑，因此一個(gè)重要的步驟就是準(zhǔn)確的觀察一般和特異的磷酸化狀態(tài)，所以蛋白抽提的另一個(gè)重要保護(hù)過程就是對磷酸化狀態(tài)的有效保護(hù)。

常見的蛋白酶抑制劑及其使用濃度如下：

抑制劑	靶蛋白	有效濃度	儲(chǔ)藏溶液	注解
Antipain	木瓜酶和胰酶	50μg/ml	1mg/ml水溶液	對胰凝蛋白酶，胃液素，纖溶酶無影響
APMSF	胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶	10-40μg/ml或10-20μM	100mmol/L水溶液	毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰膽堿酯酶
抑肽酶	絲氨酸蛋白酶	0.06-2μg/ml	10mg/mlPBS溶液	避免反復(fù)動(dòng)凍融
抑氨肽酶B	氨基肽酶	40μg/ml	溶于甲醇	不能抑制羧肽酶
Calpain抑制劑Ⅰ、Ⅱ	Calpain (鈣依賴性半胱氨酸蛋白酶)	Ⅰ:17μg/ml Ⅱ:7μg/ml	溶于乙醇	可滲透薄膜
抑糜朊酶素	胰凝乳蛋白酶	6-60μg/ml	溶于DMSO
B.M.綜合酶片	絲氨酸，半胱氨酸和金屬蛋白酶	每10-50ml細(xì)胞提取液內(nèi)加一片		不含EDTA
EDTA	金屬蛋白酶	0.2-0.5mg/ml或0.5-1.3μmol/L	500mmol/L水溶液pH=8.0
抑蛋白酶醛肽	絲氨酸蛋白酶，巰基蛋白酶	0.5-2μg/ml	10mg/ml水溶液
a₂-巨球蛋白	廣譜	1∪/ml	100∪/ml PBS 溶液	避免接觸還原劑
Pefabloc SC (boe- hringer Mannheim)	絲氨酸蛋白酶	0.1-1.0mg/ml或0.4-4mmol/L	100mM水溶液	無毒，在中性pH下較PMSF 穩(wěn)定
胃蛋白酶抑制劑	酸性蛋白酶	0.7μg/ml	1mg/ml甲醇溶液
PMSF	絲氨酸蛋白酶	17-170μg/ml	10mg/ml異丙醇溶液	每一操作步驟時(shí)新鮮加入
TLCK	胰蛋白酶	37-50μg/ml	1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸鹽溶液，pH=5.0	對胰凝蛋白酶無影響
TPCK	胰凝乳蛋白酶	70-100μg/ml	3mg/ml乙醇溶液	對胰蛋白酶無影響
亮肽素	絲氨酸，半胱氨酸蛋白酶	0.5 ug/ml 或 1 mM	1mg/ml水溶液
AEBSF	絲氨酸蛋白酶	4 mM		抑制活性與PMSF相近，更易溶于水，毒性低
氟化鈉	酸性磷酸酶	10-20mM	5M水溶液
正釩酸鈉	酪氨酸磷酸酶，堿性磷酸酶	1mM	100mM水溶液	原釩酸鈉需要處理后才能成為激活的正釩酸鈉
焦磷酸鈉	絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶	1-2mM	100mM水溶液
β-磷酸甘油	絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶	25mM	100mM水溶液