培養(yǎng)基的制備貯藏和質(zhì)量控制
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
青島培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)
培養(yǎng)基的制備貯藏和質(zhì)量控制
培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ),直接影響微生物試驗結(jié)果.適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證.
微生物實驗室使用的培養(yǎng)基可按處方配制,也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基.
在制備培養(yǎng)基時,應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或按單獨配方組分進(jìn)行配制.(脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明,配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求,結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基不得使用.)
脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏,如低溫、干燥和避光,所用的容器應(yīng)密封,尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器.商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外,還應(yīng)注明有效期、貯藏條件、適用性檢査試驗的質(zhì)控菌和用途.為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠,各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量,并要求有一定的精確度.
配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水.應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量.
配制培養(yǎng)基所用容器不得影響培養(yǎng)基質(zhì)量,一般為玻璃容器.培養(yǎng)基配制所用的容器和配套器具應(yīng)潔凈,可用純化水沖洗以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留.對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌,保證培養(yǎng)基的無菌性.
脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中,再行分裝與滅菌.配制時若需要加熱助溶,應(yīng)注意不要過度加熱,避免培養(yǎng)基顏色變深.如需要添加其他組分時,加人后應(yīng)充分混勻.培養(yǎng)基滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進(jìn)行.商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料.
培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù),特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌.
培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH值的改變.因此,培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證.此外,對髙壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布.溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量.滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度.因此,應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性,進(jìn)行全面的滅菌程序驗證.應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值(冷卻至室溫25℃測定).若培養(yǎng)基處方中未列出pH值的范圍,除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的pH值允許的變化范圍很寬,否則,pH值的范圍不能超過規(guī)定值±0.2.
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂,裝量應(yīng)相同,盡量避免形成氣泡,固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪,在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶,不得污染微生物等.應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查.
2.培養(yǎng)基的貯藏
自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期、制備人等信息,并在已驗證的條件下貯藏.商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性,生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行貯藏,所采用的貯藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù).培養(yǎng)基滅菌后不得貯藏在髙壓滅菌器中,瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放,因為冷凍可能破壞凝膠特性.培養(yǎng)基保存應(yīng)防止水分流失,避光保存.瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用,如置冰箱保存,一般不超過1周,且應(yīng)密閉包裝,若延長保存期限,保存期需經(jīng)驗證確定.固體培養(yǎng)基滅菌后只允許1次再融化,避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染.培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱,若采用其他溶解方法,應(yīng)對其進(jìn)行評估,確認(rèn)該溶解方法不影響培養(yǎng)基質(zhì)量.融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45?50℃的環(huán)境中,不得超過8小時.使用過的培養(yǎng)基(包括失效的培養(yǎng)基)應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行.
3.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗
實驗室應(yīng)制定試驗用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制程序,確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢査的需要.實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程,采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇,從而影響試驗結(jié)果的可靠性.所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗.實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH值、適用性檢査試驗,定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期.培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢査試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求.有效期的長短取決于在一定存放條件下(包括容器特性及密封性)的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性D除藥典附錄另有規(guī)定外,在實驗室中,若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控,那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢査試驗可只進(jìn)行1次.如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證,那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢査試驗.試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇,也可增加生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株.
培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗若不符合規(guī)定,應(yīng)尋找不合格的原因,以防止問題重復(fù)出現(xiàn).任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用.用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù),最好要雙層包裝和終端滅菌,如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基,那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng),以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果.